不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其 .pdf

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2010, 37(4): 445~450 明原因男性 育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶 基因突变的发现及其意义* 李博 张 朵 曾 健 富显果 柯龙凤 颜水堤 严爱贞 兰风华** (南京军区福州总医院临床遗传与实验医学科，福州350025) 摘要 为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶，即乳酸脱氢酶C (LDH-C )基因突变在男性不育发病中的作用，利用LDH-C 特异性 4 4 4 底物对 100 名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4 进行活性显色，用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4 活性低 下的患者进行LDHC 基因PCR产物的突变筛查，对DHPLC 峰形异常的PCR 产物进行序列测定 筛选到一组精子LDH-C4 活 性明显下降的患者，其中 1 名患者的LDHC 基因PCR 产物在DHPLC 中呈异常洗脱峰 对这一PCR 产物进行序列测定，发 现患者LDHC 基因第5 外显子的 115 位碱基发生了T A 的杂合改变(GenBank 登录号GU479375)，该突变使LDHC 基因的 178 位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子) ，形成截短的C 亚基 T 克隆- 测序进一步证实了该无义突 变的杂合状态 这是在人类LDHC 基因上发现的第一个突变，提示LDHC 基因突变可能是男性不育发病的原因之一 关键词 不育症，睾丸特异性乳酸脱氢酶，乳酸脱氢酶C ，DHPLC，基因突变 4 学科分类号 Q75 ，R394 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00526 睾丸( 精子) 特异性乳酸脱氢酶(testis-specific 运动等功能，最终导致男性不育 lactate dehydrogenase)，是 20 世纪 60 年代由 本文报道我们在一组不明原因男性不育患者中 Goldberg 等和另一个研究小组发现的乳酸脱氢酶同 发现的一个呈杂合状态的无义突变：L178X 据我 [1-2] 工酶之一 ，最早称乳酸脱氢酶 -X (lactate 们所知，这是在人类LDHC 基因上发现的第一个突 dehydrogenase X) ，现称乳酸脱氢酶 C4 (lactate 变 dehydrogenase-C ，LDH-C ) 与其他乳酸脱氢酶同 4 4 1 材料和方法 工酶不同，LDH-C4 只见于成年男性的睾丸，是精 子能量代谢的一个关键酶类，与精子的获能、运动 1 1 研究对象 以及精卵 合等密切相关[3] 自发现以来，LDH-C4 不明原因不育症男性患者 100 名，年龄22 ～ 一直作为避孕疫苗的研发对象受到关注[4] 动物实 40 岁，均来自我院生殖医学中心，患者选择标 [12] 验证明，以LDH-C4 或其多肽片段免疫家兔、狒狒 准 ：未采取任何避孕措施，婚后一年以上其配偶 等，可在动物体内诱导抗LDH-C4 抗体的产生，并 未孕者；女方检查无异常，排除少精(无精)症、输 使其生育率下降[5-6] 我们用