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• 810 • 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 5 期 2016 年 3 月 三叶青扩展蛋白家族基因全长 cDNA 的克隆及其生物信息学和表达分析 * 宋亚玲，向太和 ，武 盼，王 博，李姣姣，张 挺 杭州师范大学生命与环境科学学院，浙江 杭州 310036 摘 要：目的 克隆三叶青 Tetrastigma hemsleyanum 的扩展蛋白家族基因，对其进行器官表达分析，并初步探讨其功能。方法 根 据 GenBank 中登录的扩展蛋白基因保守区域序列设计 1 对简并引物，以三叶青球形块根 cDNA 为模板进行RT-PCR 扩增，再结合 RACE 技术，获得三叶青扩展蛋白基因全长 cDNA 序列，命名为 Th-exp。采用半定量RT-PCR 和荧光定量 PCR 分析 Th-exp 基因 在不同器官中的表达情况。结果 克隆获得扩展蛋白家族基因，共782 bp，其中包含630 bp 开放阅读框，编码209 个氨基酸（GenBank 登陆号KP693606 ）。Th-exp 编码的蛋白质具有典型的扩展蛋白结构特征，N 端含有 8 个半胱氨酸的结构域，C 端含有 4 个保守的 色氨酸结构域，中间含有组氨酸功能域。Blast 分析显示，Th-exp 与葡萄、醉蝶花中扩展蛋白基因具有相似性。半定量RT-PCR 和 荧光定量PCR 分析表明，Th-exp 在三叶青叶、茎、普通细根和球形块根中均有表达，但球形块根中表达强于其他器官。结论 克 隆得到三叶青扩展蛋白家族基因Th-exp 全长 cDNA，初步预测其参与了三叶青块根的发育过程。 关键词：三叶青；扩展蛋白基因；克隆；表达；块根 中图分类号：R282.12 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)05 - 0810 - 06 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.05.021 Molecular cloning, bioinformatics characterization, and gene expression analysis of full-length expansin gene cDNA from Tetrastigma hemsleyanum SONG Ya-ling, XIANG Tai-he, WU Pan, WANG Bo, LI Jiao-jiao, ZHANG Ting College of Life and Environment Sciences, Hangzhou Normal University, Hangzhou 310036, China Abstract: Objective To clone the sequence and characterize gene expression of an expansin gene from Tetrastigma hemsleyanum, and to predict its probable function. Methods According to the conservative region sequences of expansin gene in GenBank database, one pair of degenerate primers were designed for RT-PCR. The conservative region fragment was first amplified by RT-PCR from cDNA template of T. hemsleyanum. The full-length sequence of expansin gene cDNA (named as Th-exp) was extended by RACE (rapid-amplification of cDNA ends). Th-exp expression levels in different organs were conducted by semi-quantitative RT-PCR and fluorescence quantitative PCR. Results The full-length cDNA sequences of Th-exp gene were obtained in 782 bp. Th-e