以plk1 pbd 为靶点的小分子抑制剂筛选及其抗癌活性研究.pdf

中国医药生物技术 2015 年4 月第10 卷第2 期 Chin Med Biotechnol, April 2015, Vol. 10, No. 2 125 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2015.02.006 ·论著· 以PLK1 PBD 为靶点的小分子抑制剂 筛选及其抗癌活性研究 张智慧* * ，张晶，刘伟，陈云雨，司书毅，王艳宏 【摘要】 （ATP-binding pocket ）进行设计的[10-11]，但 ATP 结 目的 利用荧光偏振模型进行 PLK1 PBD 抑制剂的高通量 合区的结构保守性使其对其他激酶的抑制作用难 筛选，并对阳性化合 6143D7 的抗癌效果进行体外评价。 以区别，并且还容易与类似的药物有交叉耐药性。 方法 采用噻唑蓝比色法检测初筛阳性化合物对不同细胞 所以，为寻求更高效、专一的 PLK1 抑制剂，PBD1 系增殖的影响；流式细胞术检测化合物对细胞周期以及凋亡 成为了近年来寻找高选择性 PLK1 抑制剂的新靶 率的影响；分子对接检测化合物与 PLK1 PBD 结构域的亲 点[12-19] 。 和性。 荧光偏振方法是 Perrin[20]于 1926 年提出的 结果 利用荧光偏振模型得到的阳性化合物 6143D7 经噻 理论，通过检测荧光标记的分子或者固有荧光分子 唑蓝比色法检测显示能抑制癌细胞的增殖；流式细胞仪检测 的荧光强弱变化来研究分子间相互作用，能够直 显示该化合物加药组 G2/M 期细胞比例高于对照组并能促 接、近乎瞬时地检测结合于自由示踪剂分子的比 进细胞凋亡；分子对接结果表明化合物与 PLK1 PBD 结构 值。当小的荧光分子在平面极化光的激发下，荧光 域的亲和性良好。 寿命内（激发与发射之间的时差）小分子在溶液中 的旋转速度快，所形成的发射光大部分是去极化 结论 该化合物通过抑制 PLK1 PBD 结构域的活性发挥抗 的；但是，当荧光分子结合到大分子后，它的有效 癌作用，有望成为靶向 PLK1 的抗肿瘤先导化合物。 体积增大，旋转减慢，在与激发光相同平面上的发 【关键词】蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶； 药物筛选试验， 射光增多，去极化减弱，偏振增强。因此，荧光分 抗肿瘤； 荧光偏振； polo 样激酶 1 抑制剂 子在自由状态下偏振值较低，而在结合状态偏振值 中国医药生物技术, 2015, 10(2):125-130 较高，检测到的偏振值是这两个值的加权平均值， 从而提供了直接检测荧光分子结合到受体比值的 激酶是调控正常细胞和肿瘤细胞增殖的主要 方法[21-24] 。这种技术被广泛应用于临床和生物医学 蛋白，polo 样激酶（polo-like kinases ，PLKs ）是一 类结构和功能均高度保守的丝/苏氨酸蛋白激酶[1-2]， 领域，包括某些疾病的诊断和监测治疗药物在体内 的水平，进而用于高通量筛选，为药物的筛选提供 已经报道的 PLKs （PLK1 、PLK2 、PLK3 、PLK4 ） 了更加灵敏、简易、快速的方法。