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旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法 - 生物通
第二军医大学学报 年 月第 卷第 期 ：／／
２０１４ ６ ３５ ６ 犺狋狋 狑狑狑．犪狊犿犿狌．犮狀
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ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒ ＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ Ｊｕｎ．２０１４ Ｖｏｌ．３５ Ｎｏ．６
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ＤＯＩ１０．３７２４ＳＰ．Ｊ．１００８．２０１４．００５９８
旋转超滤：一种提取细胞外泌体的新方法
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１ ２ ２ ２ １ １ ２ １３
胡国文 ，李 青 ，牛 鑫 ，胡 斌 ，刘 鹃 ，沈晓黎 ，汪 泱 ，邓志锋
１．南昌大学第二附属医院神经外科，南昌 ３３０００６
２．上海交通大学医学院附属第六人民医院四肢显微外科研究所，上海 ２００２３３
３．上海交通大学医学院附属第六人民医院神经外科，上海 ２００２３３
［摘要］ 目的 建立一种利用旋转超滤技术从骨髓间充质干细胞（ ， ）培养上
ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓＢＭＳＣｓ
ｙ
清液中分离外泌体（ ）的方法。方法 收集 细胞培养上清，低速离心去除残余细胞， 滤器过滤除去细
ｅｘｏｓｏｍｅ ＢＭＳＣｓ ０．２２ ｍ
μ
胞碎片，采用旋转超滤技术提取外泌体。应用透射电子显微镜观察所获外泌体的形态，用蛋白质印迹法检测外泌体标记物
、 蛋白的表达，用 试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞（ ， ）
ＣＤ６３ＣＤ９ ＣＣＫ８ ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＨＵＶＥＣｓ
增殖活性的影响。结果 使用旋转超滤技术成功分离出ＢＭＳＣｓ分泌的外泌体，透射电镜下外泌体为圆形或椭圆形，直径约
，蛋白质免疫印迹法检测结果显示外泌体中有其特异标记物 、 蛋白的表达。外泌体能够促进 增殖，
１００ｎｍ ＣＤ６３ＣＤ９
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