实验五荧光抗体检测技术.ppt

实验四 荧光抗体检测技术 一、实验原理 免疫荧光技术是血清抗体以化学方法与荧光素结合后，仍保留其免疫特性，当带有荧光素的抗体与抗原结合后，则在抗原的部位有荧光抗体的沉着，在荧光显微镜下观察就可以看到发亮的荧光。 常用的荧光素： 二 实验内容： 荧光抗体法诊断猪瘟 荧光显微镜的使用 三 实验材料与试剂： 1．猪瘟荧光抗体： 购置于中国兽药监察所。 2．0.01Mol/L pH7.2PBS液 3．缓冲甘油：优级纯甘油9份和碳酸盐缓冲液1份 混合而成，高倍镜下观察使用。 4．碳酸盐缓冲液： 0.5Mol/L 碳酸钠 1份 0.5Mol/L 碳酸氢钠 3份 混合即可。 5．荧光显微镜 四 实验操作方法 ： 1．组织涂片（切片）制作： 取一点猪瘟脾淋疫苗均匀的涂匀空气中自然干燥后，立刻在室温下放入纯丙酮固定10min，取出后PBS液轻轻漂洗数次，自然干燥后染色。如不能及时染色，可用塑料纸包好，放入低温冰箱中保存。 2．荧光抗体染色： 滴加猪瘟荧光抗体（工作浓度）2~3滴，以覆盖为度，放入湿盒中，37℃感作30min（切忌染色液干涸）。以PBS液3×1min冲洗。 3．观察结果：染色片半干时，放置于荧光显微镜下 进行观察。 高倍观察：滴加缓冲甘油封片，置荧光显微镜下观察。 组织切片制作： 取新鲜的扁桃体与肾组织块，用冰冻切片机制成5μm~7μm原冰冻组织切片，粘于清洁的载玻片上（0.8 mm ~1.0mm），空气中自然干燥后，立刻在室温下放入纯丙酮固定15min，取出后PBS液轻轻漂洗数次，自然干燥后染色。如不能及时染色，可用塑料纸包好，放入低温冰箱中保存。 五 实验结果的判定： 将染色好的组织片置激发光为蓝光荧光显微镜下观察。 阳性结果：呈明亮的翠绿色荧光。 阴性结果：无荧光或荧光微弱。 六 分析与讨论 免疫三大标记技术（免疫酶技术、免疫放射技术、免疫荧光标记技术）在医学诊断以及生物学进展研究中的重要应用。 请举例说明。 * 橙红色 620 550 TRITC 四甲基异硫氰酸罗丹明 橘红色 595～600 570 RIB200 四乙基罗丹明 明亮的黄绿色 520-530 490-495 FITC 异硫氢酸荧光素 呈现颜色 最大反射波（nm） 最大吸收波（nm） 缩写 名称 荧光显微镜光路图 *