利用高效液相色谱法同时测定枇杷果实中10种植物激素[①].doc

利用高效液相色谱法同时测定枇杷果实中10种植物激素 李华，郭启高梁国鲁何桥* （西南大学园艺园林学院，重庆 400716） 摘 要：以三倍体枇杷（Eriobotrya japonica (Thunb) Lindl.）花和幼果为研究材料，建立了一套可同时分离和测定玉米素、赤霉素、、水杨酸、6-、、吲哚乙酸、脱落酸、吲哚丁酸和茉莉酸10种植物激素方法。以甲醇：乙腈：磷酸缓冲液（pH=3.0）体积比为20：20：60为流动相，流速为1 mL/min，柱温35，波长为210nm和254nm条件下，测定枇杷幼果中10种激素，其线性加标回收率在58.6%85.2%之间；检测限在0.004-4.92ng之间，精密度%-3.05%之间。此外，我们还利用该方法对番茄和甘蓝叶片中10种内源激素含量进行了验证，表明该方法可用于植物中多种激素的同时测定。 关键词：高效液相色谱；枇杷；植物激素 中图分类号： 文献标识码：A 文章编号： 植物内源激素（plant pytohormones）是植物体内自身合成的能从产生部位运输到作用部位在低浓度（1μmol/L）具有生理作用的微量小分子物质，植物发育的多个生理过程和环境刺激反应中发挥重要作用。传统认为植物激素有五大类：生长素（IAA，Indole-3-acetic acid）、细胞分裂素（CKs，Cytokinins）、赤霉素类（GA，Gibberellins）、乙烯（ETH，ethylene）和脱落酸（ABA，abscisic acid）。新近研究将油菜素内酯（BR，brassinosteroid）、茉莉酸（JA，jasmonic acid）、水杨酸（SA，salicylic acid）和独脚金内酯（SLs，strigolactones）等具有生长调节活性的信号分子也作为植物激素[1]，目前的内源激素测定仍以五大类激素为主。 植物激素在植物体内的含量极低测定植物内源激素含量一直是困扰科学家的重要难题目前常用的植物激素检测方法有酶联免疫检测法（ELISA）、高效液相色谱法（HPLC）、超高效液相色谱(UPLC)、超高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）、超高效液相色谱-质谱/质谱(UPLC-MS-MS) 等。其中ELISA 法具有简单和成本低廉等特点，但检测信号灵敏度较低，重复性较差。色谱与质谱联用技术可以在较短时间内分离鉴定多种植物激素，但由于前处理技术要求和使用成本高，未得到广泛运用。高效液相色谱法具有易操作、灵敏度高和稳定性好等特点，已成为分析测定植物激素的主要方法之一已成功应用于李[2]、榛子[3]、苹果[4]、芒果[5]骏枣[6]、梨[7]等木本植物IAA、ABA、ZT和GA3等激素含量测定。曾庆钱等[]利用HPLC法测定了荔枝根、叶和果实中IAA、GA3、ABA和ZT（回收率分别为78.52%、82.36%、79.83%和 78.57%），保留时间稳定，试验重现性好。马海燕[]采用HPLC法测定了葡萄植株生长周期中冬芽、新梢、叶片、果实四个部位IAA、GA3、ABA三种内源激素的含量变化过程，其样品中添加混标的回收率达到98.65%以上陈建华[]运用HPLC方法测定板栗枝条的IAA、ABA、ZT和GA3内源激素提取与纯化三种分离柱的方法 枇杷 (Eriobotrya japonica Lindl.)属于蔷薇科亚热带常绿木本果树，原产于中国东南部，目前广泛分布于世界各地包括中国、日本、印度、巴基斯坦、埃及、希腊、以色列、意大利、西班牙和土耳其等[11-14]。枇杷果实酸甜可口，具有丰富的营养物质，并且具有润喉、止咳、健胃等多种药用价值，深受消费者喜爱[15]。然而，枇杷的种子数目多，平均单果含有3-5粒种子，并且种子较大，约占果实总重量的20% -30%，可食率较低。目前，植物多倍体基因表达研究相当活跃也取得了很大进展。染色体的倍性能改变基因的表达模式，而基因表达模式的改变和功能的变化最终会导致表型的变化[16]。本研究小组自1997年开始率先进行天然三倍体枇杷的选育，已从筛选得到的三倍体种质资源中优选出大果、无籽、优质新品种3个。但三倍体枇杷自然结实率非常低，人为施加适量的外源GA3则可以提高坐果率，保证其果实生长发育，提高产量。为了检测三倍体无籽枇杷果实发育过程中内源激素的含量变化，本研究建立了高效液相色谱法同时测定枇杷果实发育过程中的10种植物激素的方法，为深入解析无籽枇杷坐果的机制提供科学依据。 材料与方法 1.1验材料 2015年10月在重庆市枇杷工程技术中心种质资源圃对盛花期三倍体枇杷A322株系及二倍体同源株系大五星进行单花处理（每个株系选取3株）。选取露白末期的花朵，去除雄蕊后涂抹浓度为100 mg/L GA30.1%吐温-80）和无处理为对照。分别对处