牛病毒性腹泻病毒hbrbd毒株e2基因的克隆表达及免疫原性分析.pdf

　　　 　《黑龙江畜牧兽医》科技版 ２０１５年０１月（上）１２３ 　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　 牛病毒性腹泻病毒 ＨＢ－ｂｄ毒株Ｅ２基因的 克隆表达及免疫原性分析 １ １ １ ２ １ １ １ 吉星煜 ，张　晶 ，张　月 ，常丽云 ，左玉柱 ，秦建华 ，赵月兰 （１．河北农业大学 动物医学院，河北 保定０７１００１；２．河北农业大学 动物科技学院， 河北 保定０７１００１） ＋ 中图分类号：Ｇ７８５；Ｓ８５２．６５３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４－７０３４（２０１５）０１－０１２３－０５ 关键词：牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）；Ｅ２基因；克隆；ｐＥＴ２０ｂ载体；原核表达；免疫原性 摘　要：为了研究牛病毒性腹泻病毒Ｅ２蛋白的免疫原性，试验采用ＰＣＲ技术扩增牛病毒性腹泻病毒 ＨＢ－ｂｄ毒株去除跨膜区的Ｅ２基因，将获得的ｓＥ２基因克隆到ｐＥＴ２０ｂ载体构建重组质粒ｐＥＴ２０ｂ－ ｓＥ２，并转化大肠杆菌ＢＬ－２１（ＤＥ３）感受态细胞及诱导表达，应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和Ｄｏｔ －ＥＬＩＳＡ对表达产物进行分析，取纯化的表达产物加等量佐剂免疫家兔，观察免疫效果。结果表明： ｓＥ２基因得到了高效表达，表达的重组蛋白分子质量约为３７．０ｋｕ，表达产物能诱导免疫家兔产生高 效价抗ＢＶＤＶ抗体。说明表达产物ｓＥ２蛋白具有良好的免疫原性。 ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＥ２ｇｅｎｅｏｆｔｈｅＨＢ－ｂｄｓｔｒａｉｎｏｆｂｏｖｉｎｅｖｉｒａｌｄｉａｒｒｈｏｅａｖｉｒｕｓ ａｎｄｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＥ２ｐｒｏｔｅｉｎ １ １ １ ２ １ １ １ ＪＩＸｉｎｇ－ｙｕ，ＺＨＡＮＧＪｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＹｕｅ，ＣＨＡＮＧＬｉ－ｙｕｎ，ＺＵＯＹｕ－ｚｈｕ，ＱＩＮＪｉａｎ－ｈｕａ，ＺＨＡＯＹｕｅ－ｌａｎ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ０７１００１，Ｃｈｉｎａ； ２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ０７１００１，Ｃｈｉｎａ） Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｏｖｉｎｅｖｉｒａｌｄｉａｒｒｈｅａｖｉｒｕｓ（ＢＶＤＶ）；Ｅ２ｇｅｎｅ；ｃｌｏｎｉｎｇ；ｐＥＴ２０ｂｖｅｃｔｏｒ；ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅＥ２ｐｒｏｔｅｉｎｏｆｂｏｖｉｎｅｖｉｒａｌｄｉａｒｒｈｅａｖｉｒｕｓ（ＢＶＤＶ），ｔｈｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｔｅｃｈ ｎｉｑｕｅｗａｓｕｓｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｅＥ２ｇｅｎｅｒｅｍｏｖｅｄＣ－ｔｅｒｍｉｎａｌｔｒａｎｓｍｅｒｎｂｒａｎｅｄｏｍａｉｎｏｆｔｈｅＨＢ－ｂｄｓｔｒａｉｎｏｆＢＶＤＶ．ＴｈｅｏｂｔａｉｎｅｄｓＥ２ｇｅｎｅｗａｓ ｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ２０ｂｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｍｉｄｐＥＴ２０ｂ－ｓＥ２，ａｎｄｔｈｅｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）．Ａｆ ｔｅｒｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐＥＴ２０ｂ－ｓＥ２ｆｕｓｉｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｂｙｉｓｏｐｒｏｐｙｌ－ －Ｄ－ｔｈｉｏｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ（ＩＰＴＧ），ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｐｒｏｄｕｃｔｗａｓａｎ