quantstudio 3d数字pcr系统在gmo检测中的应用 - thermo fisher .pdf

应用说明 QuantStudio 3D数字PCR系统 QuantStudio 3D数字PCR系统 在GMO检测中的应用 简介 转基因(GMO, Genetic Modified Organism)作物的种植随着经济的发展，国际贸易的 加深变得越来越广泛，在世界各地区都有大面积的转基因作物种植。与此同时，对 于转基因作物，转基因食品的安全问题，也引起了国家政府机构和一些公共组织的 广泛关注。许多国家对于转基因食品的进口亦持谨慎态度。近些年中国媒体上对于 转基因问题的争论让中国民众对转基因有了更多的认识，也让政府高度关注转基因 发展的潜在风险，要求对转基因作物和食品进行标识。所有这些都要求我们拥有敏 感高效的检测手段检出转基因，甚至是定量转基因。荧光定量PCR的方法能够检测 或者定量转基因，但其操作流程繁琐，需要制作和提取不同浓度标准品才可以准 确定量。而A BI QuantStudio™ 3D Digital PCR系统能够简洁、快速、准确地完成 转基因的检测和定量。 QuantStudio 3D数字PCR平台 数字PCR是一种全新的核酸检测和定量方法。数字PCR技术与传统的实时荧光定量PCR方法不尽相同。数字PCR是将 一份样品分配到数万个反应单元中，而这些反应单元中只有部分含有目标分子。在经过PCR扩增和信号分析后，采用 Poisson模型来计算样品中目标分子数，无需标准品即可完成绝对浓度的定量。 制备样品 划分样品 扩增DNA 计算结果 gDNA/cDNA 样品分成多个反应 阳性反应孔 拷贝数/µl 阴性反应孔 QuantStudio 3D数字PCR系统可使研究人员将数字PCR的性能和灵敏度应用于研究和检测。系统的核心是一张包含20000 个微孔的硅芯片。将反应混合物加入芯片后，密封芯片。这可以避免不相关扩增片段的潜在交叉污染。然后将密封的芯 片放置在PCR仪上进行扩增，循环结束后在QuantStudio 3D仪器上读取结果。只需30秒，DNA 目标分子的绝对浓度就会 显示在仪器的触摸屏上，并可上传至AnalysisSuite™ Cloud软件供进一步分析。研究人员可以在一台PCR仪器上运行1 -24 个样本。通过配置多台PCR仪更可提高运行通量，使实验设计具有高度灵活性。 封闭体系，防止污染 体系配制 芯片上样 PCR扩增 芯片读取 图2. 数字PCR实验。 QuantStudio 3D数字PCR系统GMO定量方法 探针引物设计 QuantStudio 3D数字PCR系统使用的探针引物无特别之处。国家标准和行业标准中针对qPCR技术推荐的各种探针引物也 同样适用于数字PCR。如果您手头有qPCR 日常检测用的探针引物以及样品，即可以开展QuantStudio 3D数字PCR实验。 本实验的探针引物如下: NOS (外源基因胭脂碱合成酶终止子) PLD (内源基因磷脂酶D) 正向引物 ATCGTTCAAACATTTGGCA TGGTGAGCGTTTTGCAGTCT 探针 FAM-CATCGCAAGACCGGCAACAGG HEX-TGTTGTGCTGCCAATGTGGCCTG 反向引物 ATTGCGGGACTCTAATCATA CTGATCCACTAGCAGGAGGTCC 样品制备 PCR扩增 QuantStudio 3D数字PCR系统可以从大量非转基因的基因 配制好的PCR反应体系通过Chip Loader被涂布到20000个 组里检测出混杂的极低含量的外源基因。这就要求我们提