hdl中胆固醇含量测定.ppt

高密度脂蛋白中胆固醇含量测定 一、目的与要求 通过高密度脂蛋白（HDL）中胆固醇含量的测定，深入了解高密度脂蛋白在脂类代谢中的作用。 二、测定原理 在脂蛋白中既有蛋白质又有胆固醇，还有磷脂的复合体，较难定量。由于其中的胆固醇含量较为稳定，因此目前以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据，即测定HDL、LDL或VLDL中的胆固醇，并分别称为高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）或极低密度脂蛋白-胆固醇（VLDL-C）。 三、实验原理 磷钨酸－镁沉淀法：磷钨酸钠和氯化镁可沉淀血清中CM、VLDL及LDL，经离心除去。 胆固醇抽提：然后测定上清液中所含的HDL中胆固醇含量。用胆固醇抽提液（乙酸乙酯和无水乙醇混合液）提取胆固醇。 显色：再用三氯化铁和浓硫酸与胆固醇作用生成紫红色化合物，与同样处理的胆固醇标准液进行比色测得其含量。 四、操作步骤 （一）在离心管C管中加入血清0.5mL，磷钨酸钠0.25mL，混匀后再加氯化镁0.25mL，充分混匀，4000r/min离心10min，小心吸取上清液0.2mL于标明He的离心管中，作为HDL抽提管He。 （二）于另一标明Te（总胆固醇）的离心管中加血清及蒸馏水各0.1mL。 （三）在He离心管及Te离心管内各加抽提液1ml，充分摇匀，4000r/min离心3min，取0.6ml上清液加入H, T管用作胆固醇的测定。 高密度脂蛋白中胆固醇含量测定操作方法表 试剂（mL） 测定管（H） 测定管（T） 标准管（S） 空白管（B） HDL上清液 0．6 - - - 总胆固醇上清液 - 0．6 - - 抽提液 - - - 0．5 胆固醇标准液 - - 0．5 - 蒸馏水 - - 0．1 0．1 显色液 1．5 1．5 1．5 1．5 摇匀 浓硫酸 1．5 1．5 1．5 1．5 旋转摇匀各管内容物，放置10min后比色。用B管调零。 分别读取各管550 nm处的光密度。 五、结果与计算 HDL胆固醇（mg/dL）= 总胆固醇（mg/dL）= mmol/L=mg/dL×0.0259 ×标准胆固醇标准液浓度×稀释倍数 ×标准胆固醇标准液浓度×稀释倍数 正常值男：1.06～1.61mmol/L(41.1～62.3mg/dL)　　 正常值女：1.08～1.74mmol/L(41.7～67.3mg/dL) 六、注意事项 （一）加磷钨酸钠后需充分混匀，再加氯化镁，否则磷钨酸钠和氯化镁作用形成稳定的复合物，致镁离子浓度降低，使LDL和VLDL沉淀不完全，造成结果偏高的误差。 （二）加显色液后需充分混匀，再沿管壁加浓硫酸，使3管散热情况相似。 1. 游离脂肪酸在血中与下列哪种物质结合运输？ D A. CM B. LDL C. HDL D. 清蛋白 单选题 2.正常血浆脂蛋白按密度低→高顺序的排列为：B A．CM→VLDL→IDL→LDL B．CM→VLDL→LDL→HDL C．VLDL→CM→LDL→HDL D．VLDL→LDL→IDL→HDL 3. 在胆固醇逆向转运中起主要作用血浆脂蛋白是: A A. HDL B. LDL C. VLDL D. CM 1. 目前认为有防止动脉粥样硬化功用的脂蛋白是VLDL （）. 正确答案：错。 2.磷钨酸钠和氯化镁可沉淀血清中CM、VLDL及LDL （）. 正确答案：对。 3.血浆中HDL的特点是正向转运胆固醇（）。 正确答案：错。 是非题 高密度脂蛋白中胆固醇含量测定 * 一、实验目的与要求：通过测定高密度脂蛋白中胆固醇的含量，深入了解高密度脂蛋白在脂类代谢中的作用。 * 二、测定原理：在脂蛋白中既有蛋白质又有胆固醇，还有磷脂的复合体，因此脂蛋白较难定量。由于其中的胆固醇含量较为稳定，因此目前以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据，即测定高密度脂蛋白、低密度脂蛋白或或极低密度脂蛋白中的胆固醇，并分别称为高密度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇或极低密度脂蛋白-胆固醇。 * 三、实验原理，高密度脂蛋白中胆固醇含量测定实验主要分为三个部分。首先，磷钨酸钠和氯化镁可沉淀血清中乳糜微粒、极低密度脂蛋白及低密度脂蛋白，经离心除去。然后用胆固醇抽提液（乙酸乙酯和无水乙醇混合液）提取胆固醇。再用三氯化铁和浓硫酸与胆固醇作用生成紫红色化合物，与同样处理的胆固醇标准液进行比色测得其含量。 *