mmp-12 蛋白包涵体复性时折叠状态核磁共振图谱与荧光光谱研究 .pdf

2012 年第70 卷 化 学 学 报 Vol. 70, 2012 第4 期, 453～458 ACTA CHIMICA SINICA No. 4, 453～458 ·研究论文· MMP-12 蛋白包涵体复性时折叠状态核磁共振图谱与荧光光谱研究 张琳琳a,b,c 冯延叶a,b 蓝文贤c 曹春阳c 徐殿胜a 杨 忠*,a,b (a 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 上海 200237) (b 复旦大学生命科学学院微生物学和微生物工程系 上海 200433) (c 中国科学院上海有机化学研究所生命有机国家重点实验室 上海 200032) 摘要 MMP-12 是癌症治疗药物靶标. 为了更好研制新药, 需要大量制备MMP-12, 但MMP-12 在大肠杆菌中以包涵体 形式表达. 因此如何优化蛋白复性过程是大量获取 MMP-12 蛋白的关键. 采用核磁共振、稳态荧光法、外源性 ANS (8-anilinol-naphthalenesulfonic acid)荧光探针三种方法监控 MMP-12 变性蛋白的再折叠过程, 以探究其复性折叠机制. 研究发现MMP-12 再折叠中点值与对应的尿素浓度几乎相等(Cm ≈4, mid-point of transition). 不同尿素浓度中MMP-12 的二维1 15 H- N HSQC (heteronuclear single quantum correlation)谱图显示, 尿素浓度从4 mol/L 降低到3 mol/L 是MMP-12 蛋白复性折叠的关键步骤. 据此我们将 MMP-12 蛋白复性从常规的梯度透析复性方法改进成等容透析复性法(即确保 尿素从4 mol/L 到3 mol/L 的浓度变化缓慢), 实现复性收率提高一倍. 关键词 核磁共振; 稳态荧光; ANS 荧光探针; MMP-12; 复性折叠 Investigation on MMP-12 Aggregation State in Urea Contained Solution by NMR and Fluorescence Spectroscopy Zhang, Linlina,b,c Feng, Yanyea,b Lan, Wenxianc Cao, Chunyangc Xu, Dianshenga Yang, Zhong*,a,b a ( State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, School of Biotechnology, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China) (b Department of Microbiology and Microbial Engineering, School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai