戴氏虫草菌丝体抗肿瘤化学成分研究 - 江苏农业科学.pdf

— １７４— 江苏农业科学　２０１７年第４５卷第５期 刘柏岑，潘卫东，娄华勇，等．戴氏虫草菌丝体抗肿瘤化学成分研究［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（５）：１７４－１７８． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０５．０５０ 戴氏虫草菌丝体抗肿瘤化学成分研究 １ ２ ２ １ １ １ 刘柏岑 ，潘卫东 ，娄华勇 ，晏文涛 ，吴翱兰 ，刘杰麟 （１．贵州医科大学免疫学教研室／贵州医科大学组织工程与干细胞研究中心，贵州贵阳５５０００４； ２．贵州省中国科学院天然产物重点实验室，贵州贵阳５５０００２） 　　摘要：研究戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖活性有效部位的化学成分及其抑制肿瘤细胞活性。采用液体深层 发酵制备戴氏虫草菌丝体，ＭＴＴ法筛选其抑制肿瘤细胞增殖活性的有效部位，反复正相柱层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０等 方法分离纯化其有效部位中的化学成分，利用ＥＩ、ＥＳＩ及１Ｄ－ＮＭＲ等技术对其结构进行鉴定；并研究他们对肿瘤细胞 增殖的抑制活性。结果显示，戴氏虫草菌丝体石油醚、乙酸乙酯萃取部位为抑制肿瘤细胞增殖活性部位，并从中分离 得到６个化合物，分别为反式－１６－十八碳烯酸（化合物１）、壬二酸（化合物２）、５，８ －麦角甾－６，２２－二烯 －３ － α α β 醇（化合物３）、亚油酸甲酯（化合物４）、亚油酸（化合物５）和十七－烷醇（化合物６）。活性检测表明，化合物２对舌癌 Ｔｃａ－８１１３细胞增殖具有较高的抑制活性，ＩＣ值为３１．９０ ｍｏｌ／Ｌ，化合物３对乳腺癌ＭＤＡ－ＭＢ－４３５细胞和ＢＴ４７４ ５０ μ 细胞具有较高的细胞增殖抑制活性，ＩＣ值分别为２５．５７、２６．３１ ｍｏｌ／Ｌ。从戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细胞增殖的活 ５０ μ 性部位中分离到６个化合物，化合物 １～２、４～６为首次从该菌丝体中分离得到。化合物２、３分别选择性地对 Ｔｃａ－８１１３细胞和ＭＤＡ－ＭＢ－４３５细胞、ＢＴ４７４细胞有较强的细胞增殖抑制活性，可能为戴氏虫草菌丝体抑制肿瘤细 胞增殖的有效成分。 　　关键词：戴氏虫草；菌丝体；单体化合物；ＭＴＴ法；抑制肿瘤细胞增殖 　　中图分类号：Ｓ１８２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０５－０１７４－０４ 　　戴氏虫草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｔａｉｉ）及其无性型戴氏绿僵菌（Ｍｅｔａ ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ公司），柱层析 ｈｉｚｉｕｍｔａｉｉ）是从贵州省都匀市茶场分离到的一种虫草菌属真 用硅胶（３００～４００、２００～３００、４０～８０目）、ＧＦ２５４薄层层析板 ［１］ 菌 ，属于子囊菌纲肉座菌目麦角菌科虫草菌属，与中国传 （青岛海洋化工厂），１０％磷钼酸显色剂，二甲基亚砜（ＤＭＳＯ， 统名贵中药冬虫夏草、蝉花、蛹虫草等是同属真菌，当地民间 Ｓｏｌａｒｂｉｏ公司），高糖ＤＭＥＭ细胞培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），胎牛 常将其作药用和保健食品。戴氏虫草多糖（ＣＤＰ）可诱导红白 血清（杭州四季青公司），０．２５％胰蛋白酶（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），青 血病Ｋ５６２细胞与早幼粒白血病 ＨＬ６０细胞分别向红细胞系 霉素链霉素混合液双抗，台盼蓝（美国Ｓｉｇｍａ公司），顺铂冻干 ［２］ 和粒细胞系方向分化 。戴氏虫草菌丝体的有效部位能明 粉（齐鲁制药有限公司），甲基噻唑蓝ＭＴＴ（范博公司）。所用 显影响小鼠免疫器官指数，抑制肿瘤组织血管形成，并抑制恶 有机溶剂均为工业级试剂经重蒸纯化处理。ＲＺＪ－ＡＰＪ１００Ｌ 性黑色素瘤细胞 ［３］ Ｂ１６向肺转移 。这提示戴氏虫草菌丝体 机械搅