基于硫醇自组装的肌红蛋白单克隆抗体金膜固相载体的构建.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2011, October 25; 27(10): 1527−1535 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2011 CJB, All rights reserved. 生物技术与方法 基于硫醇自组装的肌红蛋白单克隆抗体金膜固相载体的 构建 1 1 1 2 2 雷博 ，曲炳郡 ，杨华 ，张向颖 ，刘芳 1 清华大学微电子学研究所，北京 100084 2 北京市肝病研究所，北京 100069 摘 要: 为了在金膜固相载体上固定肌红蛋白单克隆抗体 (MbAb) ，通过在金膜上生长一层巯基酸和巯基醇的混合自组 装分子膜 (SAMs) ，用原子力显微镜 (AFM) 和X 射线光电子能谱仪 (XPS) 分析样品的性质，再以 1-(3-二甲基氨基丙 基) 3- 乙基碳化二亚胺盐酸 (EDC·HCl) 作为催化剂，自组装膜和抗体的氨基发生偶联反应，将抗体固定在金膜表面， 并进行肌红蛋白抗原 (MbAg) 的测定。结果显示，通过条件优化实验，发现50 mmol/L 的巯基16 酸和巯基 11 醇混合 乙醇溶液，60 ℃处理金膜3 h 后，再偶联40 mg/L 的MbAb 3 h ，固定效果较好，对MbAg 可测至30 μg/L 。该方法为利 用磁电阻生物传感器诊断心肌梗塞提供了理论和实验依据。 关键词: 肌红蛋白，心肌梗塞，硫醇自组装膜，金膜固相载体，单克隆抗体，磁电阻生物传感器 Construction of gold film solid-phase carrier of myoglobin monoclonal antibody based on thiol self-assembly 1 1 1 2 2 Bo Lei , Bingjun Qu , Hua Yang , Xiangying Zhang , and Fang Liu 1 Institute of Microelectronics, Tsinghua University, Beijing 100084, China 2 Beijing Institute of Liver Diseases, Beijing 100069, China Abstract: In order to immobilize myoglobin (Mb) monoclonal antibody on gold film solid-phase carrier, we grew a mixed self-assembled monolayers (SAMs) of acid thiol and mercapto ethanol on gold film. Then we analyzed the property of the sample by atomic force microscopy and X-ray photoelectron spectroscopy. Then, we used 1-(3-dimethyl aminopropyl)-3-ethyl carbodiimide hydrochloride as catalyst to couple SAMs with amino of antibody so that we immobilized antibody on surface of gold film, followed by detecti