利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cdna 文库.pdf

动 物 学 研 究 2008，Aug. 29(4) ：368-372 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research doi:10.3724/SP.J.1141.2008.04368 利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双 杂交定向 cDNA 文库 1,2 1 1,2 1,* 武景阳 ，李朝翠 ，孔清华 ，毛炳宇 （1．中国科学院昆明动物研究所 遗传资源与进化国家重点实验室， 云南 昆明 650223 ；2 ．中国科学院研究生院，北京 100049 ） 摘要：描述了一种新的构建cDNA 文库的方法，其中用来合成cDNA 第一链的随机引物5 ′-端被加上碱基d （AC ），在cDNA 双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d （GTCG ）。在cDNA 双链3 ′-端，连接头连接上 后会形成一个完整的SalI 酶切位点d （GTCGAC ），而在5 ′-端几乎不会形成SalI 位点。在SalI 酶切后利用形成 的3 ′-粘性末端与5 ′-EcoRI 粘性末端一起将cDNA 双链定向导入线性化的质粒载体，再通过转化细菌获得cDNA 文库。利用此方法构建了一个不同发育时期非洲爪蟾胚胎酵母双杂交cDNA 文库。检测了文库中空载体的比例， 插入片段大小和不同基因的表达水平几个指标，都符合预期，但是同时发现定位于 mRNA 的3 ′-端的插入片段 比例比较低。这种倾向性符合文献报道，应该是实验系统的倾向性，不影响进一步的酵母双杂交实验。这些数据 证明成功地构建了定向非洲爪蟾酵母双杂交cDNA 文库。 关键词：非洲爪蟾；酵母双杂交；随机引物；定向cDNA 文库 中图分类号：Q343.1 ；Q78 ；Q959.5 文献标识码：A 文章编号：0254-5853-(2008)04-0368-05 Construction and Analysis of A Directional Xenopus laevis Embryonic cDNA Library for Yeast Two-hybrid Using Modified Random Primers 1,2 1 1,2 1, WU Jing-yang ，LI Chao-cui ，KONG Qing-hua ，MAO Bing-yu * （1. State Key Laboratory of Genetic Resources and Evolution,，Kunming Institute of Zoology ，the Chinese Academy of Sciences，Kunming 650223, China; 2. Graduate University of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China） Abstract ： Here we describe a new strategy for cDNA library construction, in which the random primers directing the first strand cDNA synthesis contain additional d (AC) at their 5′-ends, and the linkers which will be