而脂联素有防止动脉粥样硬化斑块形成作用,因此脂联.doc

脂联素在肥胖症患者和II型糖尿病患者血清中的浓度明显低于非肥胖者，其浓度的降低导致了胰岛素抵抗和高胰岛素血症，而脂联素有防止动脉粥样硬化斑块形成的作用，因此脂联素与肥胖症患者II型糖尿病及冠心病的发生发展密切相关,即脂联素的明显降低预示着II型糖尿病及冠心病的发生明显增加。在国外脂联素是近二年肥胖症的研究的一大热点。本试剂盒采用双抗夹心法测定人血浆或血清中的脂联素，包被抗体及检测抗体采用鼠抗人脂联素单克隆抗体，用生物素、亲和素辣根酶标记检测系统，测定人血清或血浆中的脂联素。 试剂组成 1． 预包被板 12x8孔 2． 样品液 40mlx2 3． 标准品A 3ngx1 4． 10x清洗液 30mlx2 (用前加蒸 馏水270mlx2) 5． 检测抗体 12mlx1 6． 酶结合物 12mlx1 7． 显色液A 6.5mlx1 8． 显色液B 6.5mlx1 9． 终止液 12mlx1  说明书 1份 操作程序 (恒温箱温育，微孔板直接放入箱内；水浴锅温育，微孔板放入温育盒内，盒内温度应达37℃) 1． 标本：待测定的血标本，应立即离心分离出血浆(EDTA或肝素抗凝)或血清，测定前存于—80℃。 2． 取出与待测定样品相应量的板孔标记。其余板放回装有干燥剂的原包装袋里。 3． 标本稀释：取待测标本10ul+样品液90ul混匀（样品I），取样品I 10ul+样品液90ul混匀（样品Ⅱ），取样品II 10ul+样品液490ul混匀（样品Ⅲ）。 4． 标准品配制：取标准品1支加入500ul样品液,混匀（A：6ng/ml），取1ml小离心管7支（B、C、D、E、F、G、H），分别加入250ul样品液，H管为零对照管，从A管吸取250ul加入B管，混匀（B：3ng/ml）依次倍比稀释至G管（C：1.5ng/ml,D：0.75ng/ml，E：0.38ng/ml，F：0.19ng/ml,G：0.10 ng/ml） 5． 加样：每孔加100ul已1;5000稀释的样品Ⅲ，各标准品每孔加100ul，做复孔， 空白孔不加样，37℃1.5小时。 6． 洗板：300ul/孔1x清洗液,甩去,在干净的吸水纸上拍干。如此洗三遍 7． 加检测抗体：100ul/孔，37℃1.5小时。洗板同6，洗三遍。 8． 加酶结合物：100ul/孔，37℃30分钟。洗板同6，洗四遍。 9． 显色：显色液A 50ul/孔，显色液B 50ul/孔（先加A液再加B液，不得先加B液，也可等量的A液与B液混合，100ul/孔），37℃ 20分钟（从加B液算时间）。 10．终止：终止液100ul/孔，按显色液加样顺序加样。 11. 测定450nm 的OD 值（用OD540或570校正），减去空白孔。用 OD值对已知浓度的标准品作图，测定样品浓度。样品脂联素的浓度应乘上样品的稀释倍数5000。样品若不在线性范围，可对稀释度进行调整。 技术指标 1. 灵敏度高，100pg/ml； 2. 特异性强，不与小鼠及其它动 物源脂联素交叉； 3. 线性范围：100pg/ml – 6ng/ml，结果重复可靠。  注意事项 1. 样品及标准品稀释应准确。血样品应按传染性材料处理。 2. 稀释后的标准品若不能立即使用，应尽快放置在4℃。稀释后的标准品仅供当天使用。 3. 洗板后应注意拍干，并应注意尽快加下一步的反应液。 4. 每板每次测定均需做标准曲线。 5. 不同操作人员、温育温度、温育时间、洗板、加样时间、标本稀释均对测定结果有影响。稀释加样时间不可太长。样品应备份。