60Coγ射线辐照对东方百合不定芽POD同工酶的影响.pdf

维普资讯 · 园林花卉 · 北方 园艺2008(7)：162～164 6oCoy射线辐照对东方百合不定芽POD同工酶的影响 黄 海 涛，王 丹，周 丽 娟，李 卫 锋，闻方 平 (西南科技大学 生命科学与工程学院，四川 绵阳 621000) 摘 要 ：运用∞CoT射线辐照东方百合 离体不定芽，对不定芽不 同生长时期组织过氧化物 (POD)同工酶酶谱进行分析，结果表明：辐照后POD同工酶酶带数和酶带颜色与对照比较都存在 一 定差异，两个时期 6．0、8．0Gy处理的POD同工酶均出现了一条低分子量酶带，对同工酶进行 聚类分析发现高剂量处理 (≥4．0Gy)与对照的相似性较小，差异较大。 关键词 ：。。CoT；辐照；东方百合 ；POD；同工酶 中图分类号：S682．29 文献标识码：A 文章编号：1001--0009(2008)07--0162—03 同工酶是 DNA编码的遗传信息表达的产物，是分 2000~3000lx。 析与选择突变体的重要指标之一，也可作为植物辐照效 1．2．2 辐照处理 用。。CoT射线辐照百合不定芽，剂量 应变化 的一种生化分析手段，具有可靠性和可重复 分0、0．5、l10、2．0、4．0、6．0、8．0Gy7个组，2007年 3月 性_l1]。过氧化物酶(POD)是植物体内常见的氧化酶，植 27日由四川省原子核应用研究所对百合不定芽进行辐 物体内许多生理代谢过程常与它的活性及其同工酶的 照处理，辐照剂量率为0．5gy／min。辐照时各处理的三 种类有关，已有研究表明辐照会引起过氧化物同工酶的 角瓶平放在相同大小的纸箱里 60CoT射线均匀照射。 变化，POD作为常用的指示酶，已广泛应用于植物生长 1．2．3 POD同工酶酶谱研究 根据辐照材料不同的生 发育各阶段的分析中 ]。 长阶段进行取材，第一个时期是辐照后立即取材，第二 植物组织培养与辐射诱变相结合，是近年来很有前 个时期是将辐照后的材料转接到新培养基上，培养46d 途的育种新技术。辐射与离体培养结合育种方式有其 后取材。取 1．0g待测植物鲜样置于冰浴上的研钵内， 独特的优点，受到许多育种工作者的青睐 ]。研究采 加入 lmLHO研成匀浆，转入离心管，再用 2rnI前述 用。。CoT射线辐照处理东方百合鳞茎组织培养形成的不 溶液将附着在研钵壁上的研磨样品洗下并全部转入离 定芽，对辐照后百合不同时期不定芽组织内POD同工 心管，3500rpm离心 15min，上清液即为酶粗液，4~C低 酶做了详细的对比分析，为进一步了解。。CoT射线对离 温保存。电泳采用不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳， 体培养材料的作用机理提供理论依据。 浓缩胶浓度为 3．0 ，分离胶浓度为 7．5 ，电极缓冲溶 1 材料和方法 液为Tris—Gly(pH8．3)，点样量为 l0 L，以0．196／溴酚蓝 lIl 材料 为前沿指示剂，样品电泳电压为 200V，稳压电泳2．5h。 选用东方百合索邦(Sorbonne)鳞茎进行组织培养形 POD同工酶染色采用醋酸联苯胺 染色法，染色后用 成的不定芽为辐照材料，鳞茎由云南隆格兰园艺有限公 BIO-RADgeldoe凝胶成像系统拍照。测定 POD酶带迁 司提供，鳞茎周径为 l6～18cm。 移率 (尺 ，Rf=酶带迁移距离／前沿指示剂距离。 1．2 方法