冠环属线虫rDNA--ITS序列分析及系统发育分析.pdfVIP

摘要 寄生线虫的种类繁多，具有消化道，以宿主的消化物、肠组织、体液或血液为生， 易导致宿主出现贫血等临床症状，使宿主的健康受到损害：有些种类分泌的物质对宿主 的各个器官功能造成危害；其生活史复杂，病程长，会削弱人或动物的免疫力，影响宿 主的生长发育甚至生殖机能：有时一种家畜体内可寄生几种线虫，给治疗带来困难。因 此，针对不同寄生线虫种类的调查研究十分重要，为各类线虫病的诊断鉴别及预防控制 奠定理论基础，确保畜牧业和人类的生产生活健康发展。在国外，关于寄生线虫的分类、 生活史、流行病学研究、现代分子分类鉴定及系统发育学等方面的研究己多有报道。国 内对于各类寄生线虫的形态学分类和分子分类鉴定分析也有不少，但对于圆线虫的分子 分类鉴定方面仍很欠缺。本论文首次对河南省驴体内寄生3种冠环属圆线虫的：分子鉴定 分析和系统发育进行详细地研究。 本实验以我国河南省驴体内寄生的3种冠环属线虫(冠状冠环线虫、大唇片冠环线 虫、小唇片冠环线虫)的5个样品为研究对象，运用保守引物NC5和NC2扩增单条虫体 rDNA的内转录间隔区(ITS)及5．8S序列，将扩增产物回收纯化、测序及序列分析。 个；ITS．2长度为228．320 bp(其中冠状冠环线虫有92bp的长片段缺失)，变异位点105 个，简约信息位点9个：5．8S全长均为153bp，且序列完全一致。序列组成分析表明， 位，3处分别在ITS．2比对总长的172位、220位和310位。 经过序列两两比对分析得知，3种冠环属圆线虫ITS．1的种间差异性为1．8()．2．71％， 两比对分析，得到3种冠环线虫ITS序列的差异性范围为0-0．83％。ITS序列的种问变 异程度大于种内变异程度，且差异显著，说明ITS序列可以作为鉴定冠环属线虫的可靠 的分子遗传标记。以微小杯冠线虫为外群，用本研究获得的5条序列与从Genbank获得 的3条序列为数据基础，用邻接法和最大简约法构建系统发育树。结果显示，在存在多 个单倍体型和样品来自不同地理区域的情况下，大唇片冠环线虫、小唇片冠环线虫和冠 状冠环线虫均各自聚成一支；而且大唇片冠环线虫和小唇片冠环线虫总聚在一个较大分 支内，说明两者的亲缘关系较近，从表6也可以看出，它们的遗传距离较小，表明它们 之间的亲缘关系较近；而冠状冠环线虫则另聚成一支，表明与前两者的亲缘关系较远。 关键词：冠环属，内转录间隔区，PCR，序列分析，系统发育 II ABSTRACT Thereareawide of to make a rangespeciesbelongingparasiticnematodes．Theylivingby absorbing fluidsorbloodofhoststhe tract．ItcanleadIo digesta，intestinaltissues，body by digestive physical disordersofhostsbecauseof anemia．Someexcretetoxinsthat functions．Diseases species damageorganal by nematodeshavea duetothe life of causingparasitic longperiod complexhistory,weakenmmaunity humanoranimal affectthe andeven of different body，and growth