几种药物对人宫颈癌Hela细胞体外作用的分析.pdfVIP

中文摘要 la细胞体外作用的研究 几种药物对人宫颈癌He 摘 要 目的：子宫颈病变是妇女最常见的疾患之一，其严重 的情况是富颈癌。在妇女癌症中，宫颈癌的发生率仅次子 乳腺癌，位居第二。宫颈癌是我国常见的女性恶性肿瘤， 通常认为放疗和手术是治疗宫颈癌的有效方法，但有高危 因素的病例，如晚期癌、桶状癌、淋巴结转移或小细胞癌， 无论手术或放疗均不满意，宫颈肿瘤局部复发及远处转移 是治疗失败的主要原因。即使应用现代的放疗设备和根治 手术，都很难治愈。随着新的化疗药物不断问世和化疗技 术的不断发展，化疗在宫颈癌治疗中的作用日益重要，但 多数抗肿瘤药物缺少选择性抑制肿瘤的作用，均在杀伤肿 瘤细胞的同时，常伴有不同程度的毒性反应。本研究旨在 研究大蒜油、米非司酮(RU486)两种药物及二者与顺铂伍用 对入宫颈癌Hela细胞体外生长的影响，以期对临床上药物 治疗宫颈癌提供新的思路。 方法： 1．细胞培养：常规方法复苏冻存于液氮罐中的人宫颈 癌Hela细胞，接种于含lO％胎牛血清RPMI．1640培养液 的培养瓶中，置于37℃、5％--氧化碳饱和湿度培养箱内培 养，每天观察细胞生长情况，待细胞生长至70％融合时(约 2．3天)，EDTA消化，制成单细胞悬液，以备实验用。 2．MTT比色法测定细胞生长抑制情况：调整细胞密度 至3X 104个细胞／ml，充分混匀，接种到96孔培养板中， 中文摘要 1．1 l，置于培养箱内培养，至对数生长期，吸去上 每孔200 ul新鲜配制的不同浓 清液，米非司酮实验组分别加入200 度的含药培养液，米非司酮终浓度分别为5umol／L、 1 p1含等量无水 血药浓度和预实验确定)，对照组加入200 乙醇的培养液，继续培养；大蒜油终浓度分别为12．5mg／L、 100 lal培养 25mg／L、50mg／L、 mg／L，对照组加入200 1．t 液。联合组为O．5g／ml顺铂分别与上述浓度的药物合用。 每天于显微镜下观察细胞生长情况，分别于24小时、48 u 小时、72小时取出培养板，每孑L；01入20 l(浓度为59／L) MTT，轻振培养板，置培养箱中孵育4小时后，弃去上清 1．t 液，加入二甲基亚砜200l，室温震荡8分钟，使其彻底 溶解，于酶标仪570nm波长处测其吸光度A值，计算出抑 制率(IR)。同法重复实验3次。抑制率(IR)=(1．实验 组A值／对照组A值)×100％。 3．光学显微镜观察细胞形态：调整细胞密度至3×104 个细胞／ml，接种到预置盖玻片的24孔培养板中，每孔lml。 置于培养箱内培养，至对数生长期，更换培养液，加入药 物。实验组加入终浓度分别为5umol／L、10umol／L、 20umol／L、40umol／L的米非司酮，以及终浓度分别为12．5 100 mg／L、25mg／L、50mgm、 mg／L的大蒜油，同样设 对照组，24小时、48小时、72小时后取出盖玻片，Oimsa 染色，光镜下观察细胞形态。 4．透射电镜观察细胞形态：将细胞按照上述浓度接种 于培养瓶中，上述浓度药物作用24小时、48小时、72小 时后，收集细胞，2．5％戊二醛前固定，清洗后1％锇酸后 ． ±查塑墨—— —●--_——-__————●_———--_——_-_————_—_—●—_————●——————————一 固定，常规脱水，浸透，环氧树脂包埋，制成脂块，切成 超薄切片，透射电子显微镜观察