创伤性脑损伤神经细胞凋亡及其相关基因Bcl-2及Fas表达的实验性分析.pdfVIP

t铀伤性髓损伤神经细匏摘亡及其相关基西壁盟—壁宴堕垂连煎堡墼焦壁塞! 塞担壅 创伤性脑损伤神经细胞凋亡及其相关基因Bcl-2及 Fas表达的实验性研究 华中科技土学同济医学院敞医学系 研究生宋旭东 导师春启生 摘 要 f神经细胞凋亡在创伤性脑损伤中的重要病理生理学意义已受 L 到神经病理学及法医病理学的高度重视哥为了进一步阐明细胞凋 ／ 亡在创伤性脑损伤中的作用与地位，探讨凋亡相关基因Bcl．2 (B—cell lympoma／leukemia-2)和Fas在脑挫伤后神经细胞凋亡中的 调控机制，同时评价创伤性脑损伤后神经细胞Bel．2和Fas蛋白表 达与早期脑损伤时间推断的应用价值，本课题对中度大鼠脑挫伤 模型进行更深入地研究。 本课题选用成年Wistar大鼠，采用改进的Edward自由落体撞 击仪复制中度脑挫伤模型，通过常规苏木素．伊红染色技术 and (hematoxylin eosin，HE)对大鼠中度脑挫伤后12小时内继发性 脑损伤的病理学改变、神经细胞凋亡的时序空间分布特征进行光 镜观察，同时运用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白过氧化酶连 Peroxidase 接法(Streptavidin Method，SP)，并结合计算 Conjunction 机图象分析技术对凋亡相关基因Bcl一2及Fas蛋白表达变化的规律 与脑损伤时间的关系进行定量分析。 ／‘ ／实验组用自由落体撞击法形成大脑右顶叶中度脑挫伤后，按 l 不同的预定时间段(30min、lh、2h、4h、6h、8h、1卟和12h， 每个时间段大鼠6只)分批处死动物并立即取出全脑置于4％多聚 甲醛溶液(4℃)中固定；假性损伤组经0．4％戊巴比妥钠(用量为： 华中辩技_天学商济医学院法医学系硬士研究生毕娩论文 辣I页共60页 t勘伤性脑损伤神经细瞻猕亡及其相关基西B照壁基堕整鲤塞篷焦塑窭!塞趁壅 lml／kg)麻醉后仅行开颅手术而不行落体撞击，并于术后30min 处死、取脑；死后损伤组于处死后1h行落体撞击。各组标本均在 脑挫伤灶中心旁开2mm冠状切除挫伤灶前后端的脑组织，标本经 取材制片后作Bcl一2、Fas免疫组化染色观察，同时行HE染色对 照。免疫组化染色观察结果通过计算机图象分析技术行细胞平均 光度值定量测定，然后用社会科学统计软件包10．0．7版 forthesocial (statistical science，SPSS)对所 package 得数据进行单因素分组对比分析。 实验结果显示：中度脑挫伤后30分钟在脑挫伤周围即可出现 Bcl．2弱阳性表达的神经细胞：1小时后阳性细胞数量增多，染色 程度加深，伤后4小时染色程度达高峰，且阳性细胞分布广泛， 不仅在脑挫伤灶周围，在远离挫伤灶的部位如：同侧海马、齿状 回、侧脑室周围、甚至对侧脑实质内也可见到。损伤4小时后阳 性细胞染色强度又骤然降低，至伤后lO．12小时阳性细胞的着色程 度与伤后1小时对比无显著差异(PO．05)。正常对照组、死后损 伤组Bcl一2表现为阴性反应，假性损伤组在骨窗对应处周边脑组织 内可见极少量的Bcl一2弱阳性反应，但与损伤组对比存在显著差异 (PO．01)。同样，神经细胞凋亡相关基因Fas也在伤后30分钟即 被激活，但Fas蛋白合成相对缓慢，从受伤4小时后才表现稳步 升高的趋势，至伤后12小时染色最深，统计结果显示伤后30分 钟组、1—4小时组、6小时组、8一lO小时组及12小时组间Fas阳 性表达存在显著差异(P0．05)。Fas阳性细胞的分布范围随存活 时间延长也呈逐渐扩大的趋势，表现形式基本与Bcl．2阳性细胞分 布范围同步。但对照组Fas蛋白的表达则呈阴性反应。 常规HE病理切片观察中度脑挫伤