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利用GAL4-UAS系统在果蝇中分析人类基因功能
型旦鱼叁L!型△S丕煎盘墨蝇史婴煎厶耋基固功能
摘要
人类基因组草图基本完成,大量的新基因只有确定的序列及基因组定位信
息。新的焦点是要阐明这些基因的功能,果蝇对此起重要作用。
本研究利用转基因果蝇和GAL4-UAS系统初步鉴定功能基因。首先建立了
源于11个人类基因的共58个转基因果蝇品系,然后用6种不同的GAL4诱导这
些转基因在果蝇中过量表达。两个人类基因过量表达时会导致果蝇表型异常。其
1 l,E川a一
中过量表达lv一16(与延伸因子1口1[translationelongationfactoralpha
门编码相同的开放阅读框)的转基因果蝇表现出异常背板和糙眼;morcl4—8过量
表达则导致果蝇背板异常和背部刚毛脱落表型。这些结果表明在果蝇中基因过量
表达策略可用于人类功能基因的初筛,从而为大规模研究人类基因的功能提供了
一种新手段。
统计结果表明,morcl4—8基因过量表达引起的刚毛脱落随着果蝇年龄增加
而日益严重。通过序列分析发现,morcl4.8基因编码未知功能的蛋白,包含两个
构域同源。早期报道显示WH2结构域和FH2结构域可与细胞骨架相互作用,而
且果蝇刚毛发育异常可能与细胞骨架被破坏相关,这些预示了morcl4—8基因过量
表达可能影响了细胞骨架结构,从而引起刚毛发育异常。为确定其功能,我们在
人类胚肾上皮293细胞表达mo愆14—8基因融合蛋白(荧光蛋白标记),发现转染
该基因的细胞形态发生变化。
另外我们通过定点突变和PCR引物设计对两个区域进行了突变,以后将在
果蝇中观察起过量表达情况,以便确定其相关的功能结构。
a-』,morcl4—8
关键词人类基因功能,过量表达,GAL4一UAS表型,EFl
剩旦Q△曼!:坐S垂统垄墨蠛生婴窟厶娄茎里功能
Abstract
humandetected have fewinformation
Many genes genomic
by sequencingonly
abouttheir
functions.To最llthis choosethe
knowledge
gap.we powerfulDrosophila
asamodeltoelucidatehumanfunctions
genetics gene effectively.Byusinggermline
transformationwith
GAL4一UAS the
studied of
together system,we possibility
and of
characterizationhuman in
expressingfunctionally genes
lines to10human havebeenestablished.When
transgenicfly corresponding genes
toan of6different
expressedindividuallybycrossingarray GAL4driver of
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