利用基因工程途径对甘蓝型油菜抗病、抗衰老、无花瓣的分析.pdfVIP

摘要 油菜是我国重要的油料作物，具有十分重要的经济意义。长江中下游地区作为我国 油菜的主产区，4～5月油菜生育后期常遇高温多附天气．菌核病发生严重，经济损失重 分葡聚糖。分子量为24 白渗透蛋白，对多种真菌也具明显抑制作用。将两基因分别与花椰菜花叶病毒35S启动 子相连，根癌农杆菌介导法转化双低甘蓝型油菜品种6-203。对转基因T2代和T3代油 菜经过田间两种方法的接种鉴定，即苗期离体叶接种和成株期茎杆插签，结合分子鉴定， 筛选出外源转基因纯合的株系。 尝试新的转基因方法一活体转化法转化油菜，将自我调控叶片衰老系统PsAGl2·ipt 子首先经卡那霉素(Km)筛选培养基快速筛选．而后继代培养，转入温室，移栽到大 嗣。田间考察形念学·陛状，结合分子鉴定通过导入PSAG时ipf以延缓油菜功能叶片的衰 老，延长持绿期；通过转入gagal基因旨在获得无花瓣油菜，通过降低油菜菌核病再次 传播率达到抗病目的。 这三种转基因油菜的获得，将为抗病育科，和抗衰老育种奠定基础。 本研究获得的主要结果如下： 1．油菜菌核病抗性的鉴定方法一定程度决定对油菜抗(耐)菌核病性的判断。通过两 种接种方法的多次尝试和比较发现两种接种方法各有优缺点，综合起来作为判断油菜抗 (耐)菌核病性的指标才是科学合理的。 2．尝试利用活体转化方法(in planta)转化油菜，证明该法在油菜上是可行的。此法不 需经过组织培养，原位进行植物转化。转化效率可以满足基因转移及表达检测的需要。 经PCR初步鉴定获得了转基因植株，并表达了预期。胜状。 3．转基因T2代理应筛选出纯合株系。转基因抗病材料接种结果显示：在22个株系中 发现一个株系有较强的抗病性，接种病斑直径比对照显著减小。初步估计是纯合株系， blot都表明外源基因发生 两个时期的接种中表现很好，同样进行的RT-PCR和Northern 体内转录。 4．圈闾调查转基因抗衰老材料To代的单株，着重考察花期后每间隔一周株高和绿叶数 的变化趋势，收获和进行考种，考察项目包括：茎粗，～次分枝数，二次分枝数，分枝 部位，圭枝荚果数，整枝荚果数，每果粒数，千粒重．单株产量，生物学产量等a结果 发现，转基因植株生育后期叶片的持绿性显著延长；株高变化范围1．23～1．83m，，单 104．229。T2代选到一个优良株系，在Tl代表肌良好，叶片持绿期延长，有很强的营养 生K优势，而且PCR鉴定为阳性。T2代时该株系内每…+单株无一例外的表现一致，包 括生育期，叶片持绿时间等，证明为一个优良株系。 5．转基因无花瓣油菜由于环境(光照，气温)等因素综合影响，表型很难稳定遗传。 仅在To代观察到无花瓣现象，但这些无花瓣材料往往发生许多不利性状的突变，诸如 植株矮化，株型矮缩，花序无分枝，育性减弱；初花期雌蕊外露，盛花期花量极少；不 能证常结果，套袋自交后少数能结实，但结实性低，多数是瘪粒。这些突变产生的原因 可能是T-DNA插入植物基因组时，引起植物基因组的重排，导致不良性状的产生。此外， 外源基因插入的位点及插入拷贝数复杂性也影响其表达。 油菜基因工程 活体转化 葡聚糖酶 关键同： 甘蓝型油菜(Brassicanapus) 勰 AP24 Pmm?一iptgagal 月U 舀 1．基因工程与育种 1．1基因工程的基本概念 Genetic 植物基因工程(Plant 分子遗传学的理论基础上，综合采用了分子生物学，微生物学和植物组织培养的方法和 技术建立起来的，它给农作物提供了一条重要的品种改良途径。植物基因工程是指利用 分子生物学的技术，把经过分离或人工修饰过的基因，通过适当的基因转化方法插入到 植物基因组中，得到基因产物和生物活性表达，并能遗传至后代。我们通常将转基因农 Modified 作物或基因改良作物简记为GMO(GeneticallyOrganism)。 1．2植物基因工程进展概况