EarlyToxTM心肌毒性检测试剂盒在FLIPRTETRA系统中的生物相关心肌毒性数据(MolecularDevices).pdf

FLIPRTETRA 高通量实时荧光成像分析系统应用系列 （1） 药物研发早期 EarlyToxTM 心肌毒性检测试剂盒在 FLIPRTETRA 系统中的生物相关心肌毒性数据 在药物研发早期进行心急毒性评价是非常 心肌细胞舒张发生于钙离子泵把细胞内的 特点 重要的，以便于排除潜在的有毒副作用的 钙离子摄取回肌质网并和细胞外液进行钙  在生物相关性心急 化合物，从而开展进一步的研究。高度预 离子交换时。荧光信号强度随着钙离子浓 毒性分析实验中进 测性的生物相关性体外高通量筛选分析实 度降低而减小。随着下一个心跳周期重复 行功能性研究 验对于提高效率和降低心脏安全性评价失 开始，荧光信号峰值随着心跳同步被记录。 败的化合物筛选的高成本来说是至关重要  最大限度减少染料 的。干细胞分化的心肌细胞是特别完美的 使用 EarlyTox™ 心急毒性试剂盒在 对心肌细胞跳动特 细胞模型，因为它们表达了 GPCRs 和离子 FLIPRTetra 系统中已经对心肌细胞的钙离 性的非特异性影响 通道，表现出自发的类似原始心肌细胞的 子峰值频率和非典型波形图的浓度依赖性  在最大的可用信号 机械的和电学活性。 调控方式进行了验证，并通过 ® 中观察时间分辨率 ScreenWorks Peak Pro 软件作进一步的分 EarlyTox™ 心急毒性试剂盒包含一个新型 析。确证参数的改变，如钙离子峰值频率、  无需几小时，在数 的钙离子敏感染料和一个专有的进过优 振幅、峰宽、增长和衰减的时间有助于对 分钟内检测384 个 化的屏蔽技术，用来检测与心肌细胞跳动 构效关系（SAR ）方向修正或者排除化合 样品 关联的的胞质内钙离子浓度的变化。跳动 物进入药物化学或临床前研发的评判。另 模式的信号特征表现时间很短。由于相机 外，这种方法还可以用于作用于心脏的新 曝光时间短,细胞内的钙离子结合染料产 化合物开发。 生的信号比标准的钙流分析实验小。这种 新配方的试剂盒比其它商用钙染料能提 图1：EarlyTox™心急毒性试剂盒实验原理 供更强的信号。如图1 中所示，起到屏蔽 作用的分子不会进入细胞内，但降低了细 胞外背景荧光信号。这些特性有助于提高 信号窗口，为心肌跳动波形图检测提供更 多详细信息。 这个检测分析试剂盒可用于分析药物对 峰值频率（BPM）、峰值幅度和跳动波形图 的影响，且被设计为用于干细胞分化的心 肌细胞或原代心肌细胞。峰值频率取决于 EarlyTox 心肌毒性染料监测的细胞内钙离 子浓度的变化。在单个的心跳周期内，肌 质网被激活后Ca2+被释放进入胞质内。钙 结合肌钙蛋白激活肌小节，引起细胞收 缩。同步地，细胞中染料分子与游离的钙 离子结合增加了荧光信号强度。 材料和方法 图3. iPSC 心肌细胞在加入普萘洛尔后跳动频率变缓 本实验中所使用的心肌细胞，来源于 Cellular Dynamics International 的人诱导多 能干细胞（iPS