华蟾素诱导急性单核细胞白血病凋亡的体外分析.pdfVIP

华蟾素诱导急性单核细胞白血病凋亡的体外研究 中文摘要 目的 研究(体外)中药华蟾素对急性单核细胞白血病细胞株U937增 殖的抑制作用，及其诱导U937细胞株凋亡的作用，并初步探讨其可能的 急性单核细胞白血病原代细胞的凋亡诱导作用，从而为临床应用华蟾素提 供体外实验的证据。 方法 ①通过MTT比色分析华蟾素对U937增殖的抑制作用，通过概率 单位回归分析计算华蟾素对U937细胞株的半数致死剂量(IC50)：通过相 关分析证实该抑制与华蟾素剂量及作用时间的相关性；②通过Wright’S染 色、Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞特征的形态学改变；③通过琼脂 特异的方法，检测DNA分解片段的产生；④通过流式细胞仪的方法定量 检测磷脂酰丝氨酸(PS)外化的Annexin VoFITC阳性细胞百分数；⑤通过 流式细胞仪的方法，检测华蟾素作用后U937细胞株Bcl．2的表达量；⑥通 达；⑦通过ELISA的方法，检测华蟾素作用不同时间内U937细胞株的 c—AMP含量，初步探讨华蟾素诱导U937凋亡的可能机制；⑧应用上述方 法，检测华蟾素协同VPl6对急性单核细胞白血病患者细胞的凋亡诱导作 用，通过2x2析因实验方差分析的方法，统计两药协同对诱导原代细胞凋 亡的作用。 结果 ①通过MTT比色分析的方法检测，O．225ug／ml以上浓度的华蟾 素能够明显降低U937细胞株对NBT的摄取活性，具有抑制增殖的作用(P O．01)。而且该抑制作用与华蟾素作用的时间．剂量有显著的相关性 方法观察，O．9ug／ml华蟾素能在体外诱导U937细胞株出现凋亡特征的形 兰塑鲞堡壁墨丝兰簦塑些皇垒塑堡圭塑竺竺竺塞 一』鲨塑兰望翌塑釜塑坠!兰i兰 态学改变。经Agarose凝胶电泳、TdT原位标记的方法检测，华蟾素能在 体外诱导U937细胞株产生DNA分解片段。通过流式细胞仪的方法检测 Annexin V．FITC，华蟾素能使U937细胞株的磷脂酰丝氨酸(PS)外化， 降低(P0．01)，1 8小时抑制率明显增高(P=0．04)。④体外O．225ug／ml U937细胞株及部分急性单核细胞白血病患者原代细胞的凋亡诱导作用 (P=0．048，P=0．025)。 结论 ①中药华蟾素体外具有抑制U937细胞株增殖的作用，该作用呈 一定的时间．剂量相关性；②该药具有诱导U937细胞株凋亡的作用；③其 ④华蟾素在体外能协同拓扑异构酶II抑制剂VPl6，诱导急性单核细胞白 血病患者原代细胞凋亡。⑤华蟾素是一种治疗急性单核细胞白血病有前景 的药物，可辅助化疗药物对白血病的治疗作用。 关键词 华蟾素，急性单核细胞白血病，凋亡 onAcute ofCinobufacini Effects Monoeytic of Study Cells Parent Line(U937)and Cell Leukemia Abstraet Mechanismsofeffects Molecular vitrostudiesonCellularand Objective：In 7cell acute