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原肌球蛋白对血管平滑肌细胞游走能力影响的分析
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84,7%。
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蛋白转染试剂盒将鸡胃平滑肌原肌球蛋白(gTM)转染进hsmTM—p/As反义表达组
B10t法检测。
细胞中。蛋白表达用westem
三.Westem
Blot分析
膜上,用westemblot法分析TM表达。PDvF膜用5%脱脂奶粉封闭液过夜后,
以兔抗原肌球蛋白多克隆抗体为一抗(1:1000),抗兔免疫球蛋白抗体为二抗
(1:5000),结果显示以纯gTM为标准,与对照组和EGFP表达组相比,基因重组后
肌原肌球蛋白(smTM),并随gTM蛋白转染量增多smTM表达增多。
四.VSMC游走测定
Chanlber方法测定vSMC的游走,聚碳酸盐滤过膜使用前以
用Boyden’s
移至二氧化碳孵箱中,37。C孵育5小时。随机选取四个400×高倍视野(4HPF)内
游走细胞平均数评估细胞游走能力。
反义表达组细胞游走能力明显增强(Po.05)。细胞的随机游走能力在hsmTM.p基
hsmTM—B基因敲除对细胞游走的刺激作用消失(Po.05)。
结论
人平滑肌1M.p和鸡胃平滑肌TM.p的cDNA核苷酸序列的同源性达84.7%。
反插入法可实现hsmTM.B的基因重组,westernblot证实hsmTM基因敲除。
Boyden’s
下hsmTM.B基因敲除后CASMC的游走能力均增强。
blot
关键词:原肌球蛋白 血管平滑肌细胞游走 基因重组 westem
Ch啪ber
Boyden’s
SmOOth
Effectof onVascular
The TropOmyosin
Cell
Muscle
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