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抗人大肠癌单链抗体在动物体内的分布和药代动力学分析
巾文攮要
蓠 喜
大肠癌篷发满攀最高的滁性舅牵瘙之一,在我圜憋经滕第溺佼,
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俸、人深诧撬露、攀链撬搭餐,憋霹不弱程度竞驻上述缺陷。
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霹越畿海瓣癯诊繇灏治疗鹩蒜囊载俸。
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虿亵隧基透连稽曩缀褥建了攀链抗薅ND—l
seFv,潞竣凌戆嶷犬
爨抒攘孛避行了寓教表达,撼豁实验嚣窳舆有较努瓣怒疫学活热。
在上述研究基础上,本实验用蜘Tc标记抗人大肠癌ND—l
seFv,逶过动势俸蠹效射免疫显像实验、生物分布实骏及药我动力
学参数的测定,避~步证实萁在体内的嫩物学活性,炎大肠癌的临
床诊断和治疗提供依据。
。
实验材料与方法
一一一~弋
6~8周龄Balb/c纯系雌鼠腹腔注射lc一2杂交瘤细胞,使其
产生羧承,驻永经处理后,黻IgG亲纛藤斩柱I-IiTrap层折分离,接
scFv阳性克隆菌
收活性峰,得到完整抗体ND一1IgG。将ND—l
落接种于含卡那霉素的LB液体培养基中,lIrrG诱导表达,Ni—
NTA
L尿素洗脱层桥柱,接收pH4.2组分,4℃复性并透析,获得单链抗
体ND一1scFv。SDS—PAGE及凝胶灰度扫描测定抗体蛋白纯度,
Bradford法测定撩壹浓度,阕接免疫荧毙法测定活性,一20℃保存
备麓。
取4—6周龄Balb/c纯系雌性裸鼠背部皮下接种人大肠癌细
一1
像聪处死裸鼠,取眼球血、肿瘤、心、肝、脾、胃、大肠、大腿骨骼、大
腿肌肉、肾、肺等组织称重,测定放射性计数,并计算T/NT比值。
取Balb/c薷癣谍鼠分麓弪尾静脉注射辨8Tc—ND一1l毋
及”‰一ND—I
3h、6h、12h和24h剪尾取血,测定血样放射性计数,绘制血浆潸除
蘧线,并计算清除参数。
·2·
实验结果
ND一1
scFv及ND—lIs:G经纯诧惹采用SDS—PAGE电泳避
行分析检测,结果显示单链抗体在30KD处呈现一单一条带,分子
量与ND—l
势垮一戆嚣条带,分子量与ND一1重链、轻链理论德摆簿。经光
密度搦描显示两种蛋白纯度均大于90%,且间接免疫荧光结果鼹
示单链抗体及完挞抗体均有良好的抗体免疫活性。
援纸层橱法测定毋mTc对单链抗体及宠整抗俸的标记率均大
于95%,可用予动物体内放瓣免疫实验。
放射免疫显像结果显示,辨mTc标记的单链抗体予注射后1小
时即开始在肿瘤部位呈现特异性聚积,3小时呈像清晰。
动物体蠹生物分布结暴裘鹱,‰Tc—ND一1scFv注入蔫瘤裸
鼠体内后,在各正常组织中的T/NT值随时间推移不断增大,至3
小时大部分组织的T/NT比值均1
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