抗白灵抗白血病作用的分析.pdfVIP

抗白灵抗白血病作用的研究 硕士研究生：高大 指导教师：宋振岚 教授 专业名称：内科学 摘 要 目的：迄今白血病的治疗仍然以化疗为主，而化疗药物副作用大，均严重抑 制骨髓造血功能及机体的免疫功能。临床上可出现重症感染、出血，危及患者生 命，影响患者的生活质量。上世纪80年代以来，国内外有不少研究者研究发现 部分天然药物不仅副作用小，还有注重整体、攻补兼施的优点，所以从中药及天 然药物提取有效制剂已经成为抗白血病的另一重要途径。我国学者在近年来，即 已开始进行了中药诱导肿瘤细胞凋亡和分化的研究，至目前为止，已发现了许多 中药提取物，在体外实验中显示有诱导肿瘤细胞凋亡或分化的作用。抗白灵是在 我教研室多年研制的参术合剂基础上改良的中药制剂，本实验采用细胞体外培 养，观察抗白灵对白血病细胞有无杀伤或诱导凋亡及分化作用，从细胞及分子水 平探讨其作用机理，目的是为寻找一种选择性杀伤白血病细胞、高效低毒的诱导 分化及凋亡的中药方剂提供实验依据。 方法；1．通过MTT试验、台盼蓝拒染检测活细胞数，观察不同浓度抗白灵 作用后HL一60细胞增殖的改变：2．通过细胞形态学、流式细胞术、DNA琼脂糖 凝胶电泳进行细胞凋亡的检测和观察：3．以药物维甲酸为阳性对照组，采用 6．25m∥mI浓度抗白灵作用HL．60细胞72小时，通过细胞形态学观察、硝基四氮 唑蓝(NBT)还原实验、细胞吞墨实验来观察抗白灵作用后HL一60细胞分化情况。 4．采用二步法体外药物作用前后原代自血病祖细胞集落(CFu—L)生长抑制实验 及正常粒单祖细胞集落(GM-CFu)生长抑制实验，观察不同浓度抗白灵对CFu．L 集落的作用及对正常GM．CFU集落体外生长的影响。 的抑制作用并呈剂量、时间依赖关系，半数抑制浓度约为25．Om咖l。2．典型的 细胞形态学改变、DNA琼脂糖凝胶电泳条形梯带的出现和流式细胞仪检测亚G1 峰的检出等证实抗白灵能诱导自血病细胞凋亡；3，NBT还原实验和细胞吞墨实 验：在抗白灵(浓度为6．25m∥m1)作用72小时后，NBT阳性反应率和细胞吞 墨率分别为50．8％和56．O％，明显高于对照组。全反式维甲酸(10。6moI／L)作用 组NBT阳性反应率和细胞吞墨率分别为55．3％和69．o％，稍高于抗白灵作用组，但 无统计学差异。形态学观察可见细胞向成熟细胞阶段分化；4．抗白灵在 12．5mg／ml一25．Om∥m1范围内能显著抑制体外白血病祖细胞集落的形成，但对正常 祖细胞集落的形成影响不大，二者之间有显著性差异。 结论：本实验发现抗白灵抑制HL．60细胞增殖并呈剂量、时间依赖关系，既 能影响细胞周期时相，使细胞滞留于Gl期，诱导HL一60细胞凋亡，又能促进HL一60 细胞分化，其诱导分化能力与阳性药物维甲酸相近，而且对白血病祖细胞具有选 择性抑制作用。提示抗白灵可能会成为一种治疗白血病很有应用前景的天然中药 制剂。 关键词： HL一60细胞系细胞凋亡 细胞分化 The on anti-leukemiaaction studyKangbailin Da Postgraduate：Gao Zhen—lan supeI’visor：Song Medicino Speciality：IⅡternaI abstract nlecurrem雠a昀entfor 0n 1eIlkemia objectiVe： substalltiallyrelychemomerapy．Most suedin haveseriousside in