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抗骨桥蛋白抗体防治动脉粥样硬化的实验性分析
中文摘要
一————二———————————————————————一
抗骨桥蛋白抗体防治动脉粥样
硬化的实验性研究
摘 要
目的:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种心血管
系统的炎症性疾病,炎症反应贯穿于AS的整个病理过程。骨
桥蛋白(osteopontin,OPN)是细胞外基质的一种粘附性蛋
muscle
smooth
白,可由增殖活跃的血管平滑肌细胞(vascular
celLvsMc)合成和分泌,具有诱导细胞粘附及迁移的作用。
此外,OPN还具有类细胞因子的作用,参与炎症反应。在
AS发生发展过程中,OPN发挥着重要作用。本实验以抗OPN
抗体为药物通过静脉给药阻断血管损伤部位OPN的功能,
观察了对AS的防治作用,并对其作用机制进行了初步探讨。
方法:
1.动物模型的建立及分组:将12只SD大鼠随机分为
两组,模型组和预防组,每组6只。模型组,连续三天灌胃
给予VitD3(总量为50万单位/kg),之后用高脂饲料以159/
只/天喂养2l天。预防组,在给予ⅥtD3灌胃和高脂饲料的
同时,经尾静脉注射抗OPN单克隆抗体(滴度为1:1000),
其用法为:0.5ml/次,隔日一次,共7次。实验前及实验后
分别测大鼠的体重。每次注射抗OPN抗体后O、2、4、6、8、
lo、12小时及24小时测肛温。实验中观察大鼠的一般情况。
两组动物分别于实验前及实验开始后10天、17天及24天取
血,分离血清,用于C一反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子
一Q(TNF—a)和Ca2+含量的测定,并于最后一次取血后将大
中文摘要
鼠处死,留取主动脉血管进行病理切片、平滑肌Q一肌动蛋
白(SM—Q Western印迹和组织C一+
actin)免疫组化染色、OPN
含量的测定。
2.SM.Q
actin免疫组化染色:石蜡切片常规脱蜡,微波
抗原消化5min。封闭液室温孵育10min。加入1:1000稀释的
actin单抗(阴性对照用PBS代替),湿盒4。C
特异性SM.Q
过夜。继而依次与生物素标记的二抗(1:1000稀释)和辣根
酶标记的链霉卵白素于37℃孵育15min。用DAB显色。
3.OPN
Western印迹分析:取对照组和预防组大鼠主动
脉蛋白提取液进行SDS.PAGE,电印迹转至硝酸纤维素膜上,
依次与一抗、二抗进行结合反应,Western印迹结果用凝胶
成像分析系统进行定量分析。
4.血清及组织Ca2+含量的测定:用全自动生化分析仪测
定,具体操作按试剂盒说明书进行。
5.血清中炎性因子含量的测定:采用免疫浊度法测定
CRP含量,用放免平衡法测定TNF—Q含量。
结果:
1.一般情况的变化:实验前后两组大鼠的体重基本上无
多大变化,两组间无明显差异。预防组大鼠前四次尾静脉注
射抗0PN抗体后,体温在8小时之内升到最高,达38.4+0.14
℃(P0.05),之后体温下降,从12小时到24小时,体温基
本降至正常范围内。后三次注射抗体后,体温不再出现升高
的现象。整个实验过程中,模型组大鼠的体温在正常范围内
波动。两组大鼠的一般情况良好。
2.形态学变化:主动脉切片显示,模型组可见血管内皮
下间隙增宽,内含小空泡,有些部位可见大空泡;中膜VSMC
中文摘要
增生,排列紊乱或隆起,中膜弹性膜紊乱、断裂;有些部位
有明显的钙化形成,钙化区周围可见到泡沫细胞。预防组仅
见少许泡沫细胞分布于病变部位;中膜VSMC排列也较紊
乱,但增生较轻;弹性膜轻度紊乱、偶见断裂;钙化区较少
且不明显,未见到大空泡的形成。结果提示,预防组的病变
程度较模型组轻。
3.血管壁中VSMC表型标志蛋白的表达变化:SM.Q
actin是分化型
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