抗除草剂Bar基因导入小麦栽培品种的分析.pdfVIP

摘 要 小麦是重要的粮食作物之一，利用基因工程进行遗传改良的研究一直倍受人 们关注。本研究以安徽本地小麦栽培品种为材料，通过建立起良好的再生休系， 利用基因枪，将含有抗除草剂Bar基因的植物表达载体，导入安徽优良品种小麦 幼胚愈伤组织，并通过GUS瞬时表达情况对基因枪轰击参数进行了优化。用除 草剂对轰击后的材料进行分化生根筛选，共获得33株抗性再生苗。通过PCR检 测和涂叶检测，初步证明其中有4株已将Bar基因整合到小麦基因组中并且得到 剂的Bar基因转育到这些小麦品种，通过对转Bar基因小麦人工杂交与回交后代 除草剂抗性的连续跟踪鉴定，研究了Bar基因在小麦杂种后代的遗传表现。结果 表明： 1小麦再生体系的建立 小麦幼胚离体培养中，基因型和培养基是建立良好再生体系的主要因素。从 愈伤组织的诱导率、生长质量、分化率和再生率来看，均有扬麦158安农98005 皖麦33安农92484。小麦幼胚在Ms+2．O mg／L2，4-D+0．5m班ABA培养基诱导 在以上再生条件下，幼胚愈伤再生频率显著提高。 2小麦基因枪转化体系的建立 并通过Gus基因的瞬时表达优化了转化条件。结果表明：在沉淀剂为50“l 2．5movL mol几亚精胺，金粉／DNA用量为250 CaCl2+20Ⅲ0．1 mg，o．5¨l，轰击距 h和轰 离在9cm时，GUS基因具有较好的表达效果，受体材料分别在轰击前4 击后16 h作渗透培养(O．4 103。94．9×10’Pa，每皿轰击一次。 3转化体的筛选和抗性植株的获得 确定了不同筛选阶段的选择压浓度：愈伤组织继代、分化、生根时PpT分 别为3 m叽和15mg，L。抗性植株经PCR检测后最终得到了扬麦158 mg，L、5 和安农98005两个品种的4株转基因植株，最高转化频率为O．66％。对其叶片作 除草剂PPT的表型性分析，结果有2株表现完全抗性，2株表现部分抗性，表明 Bar基因己在小麦植株中得到表达，转化率在O．33％加．66之间。转化周期为3～4 个月左右。 4杂交育种 以含Bar基因的抗除草剂小麦基因遗传工程体为基因供体，与安徽品种进杂 交，获得的Fl后代均为抗性植株。进行自交获得的F2代中抗除草剂植株与感除 草剂植株的分离比基本符合3：1的分离比，与安徽品种进行回交得到的B1Fl代 中，分离比为1：1。结果表明，抗除草剂转基因小麦杂交与回交后代Bar基因的 遗传，符合l对显性基因的分离比例和盂得尔遗传规律。 关键词：Bar基因，小麦，抗除草剂，基因枪，转化，杂交 II Abstract world for wheat，a thre of major cmps，isprimarytarget application genetic to characteristic，Inmis engineering impr0Vinga伊onomic p印er，theregeneration Offour wheat、Ⅳas system established．theimmature calliusedas genetypes embroys tobebombardmentwith coated