猪隐孢子虫病流行病学分析及隐孢子虫动物模型的建立.pdfVIP

中文摘要 隐孢子虫病是一种由隐孢子虫引起的呈世界性分布的人兽共患原 虫病。该病给人类健康和动物生产带来严重危害，是人类艾滋病患者 死亡的原因之一。迄今尚无预防和治疗本病的特效药物，为了摸清隐 孢子虫病的流行特点和发生规律，本研究采用病原学和分子生物学方 法对安徽省猪隐孢子虫病流行情况进行了调查。在此基础上，用所获 猪源隐孢子虫卵囊建立了动物(小鼠)模型。 首先，采用金胺酚一改良抗酸染色法和饱和白糖溶液漂浮法对安徽 省l1个县、市739头猪隐孢子虫感染情况进行了调查。其总感染率分 (P0．05)。对不同地区猪隐孢子虫感染率间差异性进行比较，淮北 地区猪隐孢子虫感染率极显著地高于江淮之间和皖南山区(P0．01)， 江淮之间和皖南山区猪隐孢子虫感染率间差异显著(P0．05)；对不 同年龄段猪隐孢子虫感染率间差异性进行比较，4月龄以内(含4月龄) 猪隐孢子虫感染率极显著地高于4～8月龄(含8月龄)和8月龄以上 孢子虫感染率间差异不显著(P0．05)；公猪和母猪隐孢子虫感染率 间无显著性差异(P0．05)。调研数据处理结果表明，安徽省猪的隐 孢子虫感染存在地区性和年龄差异，但与性别无关。分别对金胺酚一改 良抗酸染色法和饱和白糖溶液漂浮法检获的隐孢子虫卵囊进行形态学 pSFVU用 在安徽尚属首次。 其次，从上述739头猪的粪样中取148份，应用PCR方法进行检 测。根据隐孢子虫SrDNA的基因序列，合成隐孢子虫属特异性引物。 采用蔗糖溶液漂浮浓缩卵囊、液氮冻融裂解虫体的方法制备模板DNA， 与隐孢子虫属特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)，扩增出540 bp 分子水平证实安徽省猪体内存在隐孢子虫病原。经金胺酚一改良抗酸染 色法及饱和白糖溶液漂浮法判为阳性的猪粪样，PCR方法亦为阳性，阳 性符合率为100％。在采用金胺酚一改良抗酸染色法判为阴性的1lO头猪 粪样中，有9份经PCR方法判为阳性，说明PCR方法比病原学方法敏 感性高，可用于感染强度较低的猪粪样中隐孢子虫卵囊的检测。 免疫功能低下者对隐孢子虫特别易感。本研究还采用免疫抑制药 物(地塞米松)降低动物免疫功能的方法，利用小鼠建立了隐孢子虫 感染的动物模型。 先用地塞米松(DEX)对小鼠进行最佳免疫抑制剂量和时间筛选试 mLDEX剂量连续饮水5天 验，得出20日龄昆明系小鼠以1．0rag／100 效果最佳。 再用猪源隐孢子虫(从病原学方法检测感染强度较高的猪体内分 6个)分别经口接种于处 离)￡muris和￡parvum卵囊(各1．75×10 于免疫抑制状态的小鼠体内。免疫抑制接种组小鼠从接种后第2天开 始从粪便中排出少量卵囊，以后逐渐增多，分别至第7天(￡parvum) 和第8天(DmuriS)进入排卵囊高峰期，小鼠排卵囊呈明显的间歇性， 每隔1～2天为一个高峰期，￡pa：vum感染小鼠两次排出卵囊高峰期之 间间歇的时间比￡IllU-riS感染小鼠的短，进入排卵囊高峰期比￡muris 感染小鼠早，临床症状、病理变化比￡flluris感染小鼠明显。经鉴定， 免疫抑制接种组小鼠粪便中排出的隐孢子虫卵囊与接种的卵囊为同种 小鼠体内定殖。表明猪源隐孢子虫只有在免疫抑制状态下才能在小鼠 体内定殖并完成其整个发育过程。 综上所述，安徽省猪隐孢予虫分布广泛，4月龄以内(含4月龄) 虫，猪源￡muris和￡parvum可以感染小鼠。本文流行病学研究结果 为安徽省猪隐孢子虫病的防治提供了理论依据；所建立的猪源隐孢子 虫动物模型为今后隐孢子虫的体外培养、生物化学、免疫学、致病机 理及该病的治疗等方面的研究奠定了基础。 关键词 猪隐孢子虫隐孢子虫病流行病学动物模型 Abstraet is a worldwide whichhas Cryptospridiosis anthropozoonosis