生物抗菌肽的分析及葡萄糖耐量因子对鼠肝胰岛素受体基因表达的影响.pdfVIP

摘 要 a1 crobi 抗菌肽(antimi peptides、是多种动物对微生物等因京侵染产生的免 疫应答反应的产物，具有分子嚣低、热稳定、强碱性和广谱抗菌等特点，其独特的 抗荫机理能在细胞质膜上形成离子通道，引起胞内物质泄露，从而杀灭细菌。当=争 抗生素药物是人类对付细菌等病原体引起的备类疾病的主要手段，但病原微生物的 抗药性已成为不容忽视的问题。抗菌肽由丁其抑制或杀灭病原微生物的特殊机理消 除了病原微生物易产生抗药性这一问题，从而最有希望成为补充和替代抗生紊的新 型药物。由丁_从动物组织难于获取大量天然抗菌肽，因此利用基因工程进行抗菌肽 药物开发成为人们关注的焦点。 本实验主耍研究的是Magainin—Protegrin杂合抗菌肤基因】。程菌的构建、表 达、纯化及活性测定。Magainins是爪蟾的皮肤在一定的环境压力F分泌出的抗感 n是 染和促进伤口愈合的成分，低浓度便可抑制许多细菌和真菌生长：Protegl’i 1993年从猪的中性白细胞中分离得到，研究发现它具有抗爱滋病毒的功能。 该实验通过取^lagainin和Protegrin主要生物活性的氨基酸序列并人工合成其 编码基阕，在合成基因的两侧添加适当的酶切位点。剥用现有蛋白结构预测软件进 行分析避免空间位阻，然后在两个小的肽链之间加上起连接作用的3个氨基酸。将 该序列连接到pGEX一4T一】表达载体上构成重组质粒pGEX一4T～l叫P，将该质粒转化列 E coti 0．75mM的IPTG诱导表达。离心收集蔚钵，超声破碎处理后，4℃，14，000rpm离心 收集上清，获得以可溶性形式存在的表达产物。Tris—Gly-SDS—PAGE分析表明，在 31KD处出现明显的表达条带。表达的蛋向经亲和拄层析，纯度达90％，最后进行了 抑菌检测。 男外本文还研究了实验小鼠注射复方葛根胶囊(主要成分是葡萄糖耐量因子 GTI?)后对肝脏内胰岛素受体基因表达的影响。以Cr”为主组成的GTF能把胰岛素 结合至Ⅱ膜受体上并促进胰岛素活性增强，能健进糖代谢和脂代谢。该实验通过提取小 鼠肝脏的RNA，反转录后PCR半定量分析胰岛素受体基因的表达情况，结果表明蚌j 药肝有明显效果。 Abstract in and aminoacid of Pro— Firstly．the sequencemajorbioactivityMagainin havebeenfoundedfromt11eGenebankthentherelatedhas te碰nin and gene to two of been areaddedthe sidesthe siteS artificallysynthesized，Theenzyme with two arecoilneCtedthethreeaminoacid synthesizedgene．Thepeptides afterthe the the of of softwareon the structure analysis predicatiOilprotein toavoidtheinterfe