白血病抑制因子LIF对抗霉毒A诱导的PC12细胞凋亡的机制分析.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 研究背景 抗霉素A(AntimycinA，AMA)是从链霉菌属中提取的A1和A3的混合物。 研究表明，AMA能够抑制线粒体呼吸链内部的电子传递，使线粒体内外膜质子 梯度降低，造成活性氧大量积累。在正常细胞内，活性氧主要由线粒体呼吸链 产生，线粒体呼吸链的紊乱将导致过量的活性氧释放到胞浆中，从而引发氧化 应激。 细胞凋I：：(apoptosis)是细胞一种程序性死亡，是诱导细胞自杀的过程，一些 神经退行性疾病的病理过程与凋亡有关。由于过量的活性氧与细胞凋亡密切相 关，因此AMA也常被用来诱导细胞凋亡。 白血病抑制因子(1eukemiafactoL inhibitoryLIF)属于白介素一6(IL-6)家族，许 多组织和细胞(活化的T细胞、单核细胞、神经胶质细胞、肝成纤维细胞、骨 髓基质细胞、胚胎干细胞等)均可分泌一定量的LIF。研究表明，LIF在中枢神 经系统的损伤修复过程中起着重要作用。JAK．STAT信号通路是近年来发现的一 条由细胞因子刺激的信号转导通路，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调 节等许多重要的生物学过程。IL-6家族细胞因子的作用均与JAK-STAT信号通 路有关。 PCI2细胞取自大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤，加入神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)后，在形态和功能上向交感神经元分化，常被当做体外神 经元模型来作生理、病理及毒理等研究。 目的 本实验通过研究LIF对AMA诱导PCI2细胞凋亡的作用，探讨在此过程中 LIF引起PCI2细胞损伤的机制，从而为治疗神经退行性疾病的研究提供实验基 础。 材料与方法 测细胞活性，以确定AMA模型组和LIF实验组中细胞的存活数量；分别用 Hoechst33342和annexin V-FITC／PI荧光标记细胞，用荧光显微镜和流式细胞仪 定性和定量检测细胞凋亡；用氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯(6．chloromethyl-，2， 中文摘要 7-dichlorodihydrofluoresceindiacetate，acetyl 流式细胞仪分析细胞内荧光强度来检侧细胞内ROS的变化。用超氧化物歧化酶 中的作用。 结果 1．模型组AMA能够诱导PCI2细胞凋亡，低剂量的LIF(0．5．1ng／m1)可使 减少凋亡细胞的数量，高剂量的LIF则增加凋亡细胞的数量； 2．AMA诱导的细胞凋亡与ROS紧密相关，低剂量的LIF(0．5．1ng／m1)能 够清除PCI2细胞内的ROS以提高细胞的存活，高剂量的LIF(25．50ng／m1)则 伴随有ROS的增多； 3．AMA能够诱导细胞抗氧化系统产生紊乱，降低SOD的活性，而低剂量 的LIF(O．5—1 不再增加，反而降低。 结论 实验证实了AMA通过诱导产生ROS，导致细胞凋亡，降低PCI2细胞活性， 率。当浓度高于25 细胞造成凋亡。结果提示，细胞内ROS的生成量与SOD活性的变化均与 JAK．STAT信号传导通路有关。 关键词：抗霉素A； 白血病抑制因子； ROS：PCI2细胞；JAK．STAT Abstract Abstract Background Reactive oxide hydrogenperoxide(H202)，nitric oxygenspecies(ROS)include radical(·OH)and (NO)，superoxideanion(02]，hydroxyl Thesemoleculeshave been inthe of manyimportant