神经母细胞瘤细胞系的建立及ATRA诱导细胞分化及TrkA表达的分析.pdfVIP

第一部努孛文接要 第一部分 神经母细胞瘤细胞系的建立 硕士研究生鹿 洪亭 指导老师 藿谧教授 中 文 摘 要 目的：神经母细胞瘤鼹儿童常见的恶性肿瘤之一，少数患儿肿瘤可以分化 戏熟，最爱囊彳亍消失；可蔽认为是辫瘩诱等分证治疗静瑾憋模型。多项体争}研究 报邋，维甲酸对多种神经母细胞瘤细胞系(如LA-N一5、SH—sY一5Y、GI—L卜N、 SK—N—BE2)骞搀潮生长佟建羁(或)诱导分伍、诱嚣蹋亡{筝翔。莺舞已建立了多 种神经母细胞瘤细胞系，为了研究神经母细胞瘤的细胞生物学特性，寻找体外诱 导搴孛经母缨艟瘗纲藏分化懿模型，本实验室建立了耱经母缨艇瘗缩瓣系，兔全反 式维甲酸诱导神经母细胞瘸细胞分化提供一个良好模型；提取所培养细胞总 RNA，通过RT—PCR方法检测TrkA豹表达；同时，建立襻经碍缨您瘿缨戆系也霹 为以后的转基因治疗提供一个体外治疗的基础；建崴神经母细胞瘤细胞系还可以 薅寒体外研究取材瘸人享枣经母缀臌瘿的分予生物学特征及其与病人秘癯恶性程 度、肿瘤分期、病蠼组织类掇和病人预后、肿瘤自消之间相互之间的关系。利用 体外培养技术则可以方便地观察肿瘸的浸润过程，粥丽体外培养技术有利于研究 j挣瘸细胞浸润机制以及各种因素包括细胞鞠子、激索和药物对浸润过程的影响。 通过将肿瘤细胞移檬到缺乏T细胞免疫反威的裸小鼠体内，“借腹”生长，并结 合後瑶一定的实验翻素，奁瓣瘤细胞酌签定、瓣瘤细胞体肉分纯和诱导分化、胂 瘤细胞病毒检测、抗癌药物筛选以及基因治疗等方蕊将得到广泛的应用。 方法：光菌条件下，取本院住院神经母细胞瘤病人的新鲜手术标本，选取肿 瘤来坏死部分，放入盛有DMEM培莠液的无藏瓶内，瓶嗣圉放置冰块，迅速遴至 细胞净化培养室。邋过组织块培养和消化培养法两种方法培养细胞，将神经母细 胞瘤细胞放入DMEM培养滚，孙加10％胎牛敷溃及青、链霉素，置于37℃、5％c氇、 100％湿度的二氧化碳培养箱内培养：将培养的细胞通过机械刮除法和选择性酶消 化法进行分离与纯化，建立细胞系，作为细胞模型。 终聚：渚忧培养方法效栗较好，当天邵可见从脾瘸标本上消化下来的细胞，全 部为小圆形细胞，第2天即可见细胞的形态变化，成小梭形，织块法培养大约要 7天磊才才疑组织块周銎至皴射获游疆土述绸魏。分离纯纯嚣熬瓣瘸细缒形态基 本一致，成一端或两端胞浆突起的短梭形细胞，NB细胞呈小梭形，部分呈泪滴 第一部分孛文撬要 状，少数呈三角形，这种为幼稚型细胞。露些细胞胞浆突起延长，被视为成熟型 细脆，标志着建成了神经母细胞瘤细胞系。 结论：本实验塞有能力自建神经母细胞瘤细胞系；所建细胞系可用于进行 斛触诱导神经母缁胞瘤细胞分纯及TrkA袭达的磷究。消化培养方法培养细胞眈 组织块法效果更好。 关键溺：神经母缨稳瘸细戆黎 2 籀～部分英文摘要 I Theestabli shmentofNBce|IiRe i sh Abstract EngI i ve：Neuroblastomaisone tumors Ob；ect ofthemostcoml越on ofchildren，some ofthemcan matureand itis asa grow disappearspontaneously．Soregarded good model