花斑皮蠹和黑斑皮蠹(鞘翅目：皮蠹科)的快速分子鉴定.doc

花斑皮蠹和黑斑皮蠹(鞘翅目：皮蠹科)的快速分子鉴定 第 ２ 卷 第 ２期　 ７ ２１ ０ ２年 ２月 　 北 京 农 学 院 学 报　 Ｖ０ ．２ １ ７。Ｎｏ ２ ．　 Ａｐｒ ．，２０１ 　 ２ Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｂ Ｊ ＮＧ　 ＮＩ 　 　 ＥＩ Ｉ Ｕ ＶＥＲＳ ＴＹ　 　 Ｉ ＯＦ ＡＧＲＩ ＣＵＬＴＵＲＥ　 花 斑 皮 蠹 和 黑 斑 皮 蠹（ 翅 目 ：皮 蠹 科 ） 鞘 的　 快 速 分 子 鉴 定　 刘　 聪　， 蒋　 湘。 　，樊 武 疆　，王 新 国。 ，吕英姿　 ，林 惠娇。 ，刘 二 龙　 ，夏来 群　 ，班 丽 萍。 　 （ ．中 国 农 业 大学 农 学 与 生 物 技 术 学 院 ，北 京 １０ ９ ；２ １ ０ １３ ．中华 人 民 共 和 国 黄 埔 出入 境 检 验 检 疫 局 ， 　 广 州 ５０ ３ ； ３ １ ７０ ．中 国农 业 大 学 动 物科 技学 院 ，北 京 １ ０ ９ ） ０ １ ３　 摘 要 ：斑 皮 蠹 属 昆 虫 个 体 小 ，形 态 高 度 相 似 ，仅 依 据 外 部 形 态 难 以 鉴 定 。用 线 粒 体 细 胞 色 素 氧 化 酶 亚 基 Ｉ 　 （ ＯＤ 基 因 的通 用 引 物 ，分 别 以黑 斑 皮 蠹 （ ｒ ｇ ｄ ｒ ａ ｇ ａ ｒ ｍ） Ｃ Ｔ ｏ ｏ ｅ ｍ 　 ｌｂ ｕ 、花 斑 皮 蠹 （ ｒ ｇ ｄ ｒ ａ ｖ ｒ ｂｌ ） 的 Ｄ 　 Ｔ ｏ ｏ ｅｍ 　ａ ｉ ｉ ａ ｅ ＮＡ 为 模 板 ，进 行 Ｐ Ｒ 扩增 、测 序 。 比较 二 者 Ｃ Ｃ Ｏ１的 碱 基 序 列 ，找 出 所 有 序 列 多 态 性 位 点 及 相 应 的 限 制 性 内切 酶 ， 　 最 终 选 取 限 制 性 内切 酶 ＡｆＩ对 二 者 进 行 酶 切 。结 果 表 明 ，黑 斑 皮 蠹 的 Ｃ Ｉ序 列 可 被 限 制 酶 Ａ ｌ 切 开 ，形 成 ５ ５ ｌ Ｉ Ｏ ｆＩ Ｉ ３　 ｂ ｐ和 ３ ７ｂ 两 部分 ， 而 花斑 皮 蠹 Ｃ Ｉ片 段 中 因 不 具 有 Ａ ｌ 酶 切 位 点 而 不 能 被 切 开 ，从 而 将 二 者 成 功 区 分 ，实 现　 ４　 ｐ ｏ ｌ１ Ｉ 对 黑 斑 皮 蠹 和花 斑 皮 蠹 的快 速 分 子 鉴 定 。 　 关 键 词 ：黑 斑 皮 蠹 ；花 斑 皮 蠹 ；Ｃ 基 因 ；酶 切 ；分 子 鉴 定　 ｏＩ 文 献 标 志 码 ：Ａ 　 ｄ ｉ ０ ３ ６ ／．ｓｎ １ ０ — １ ６ ２ １ ． ２ ０ ９ ｏ ：ｉ ． ９ ９ ｊｉ ． ０ ２３ ８ ． ０ ２ ０ ． ０ 　 ｓ 中 图分 类号 ：￥ ３ ． 　 ４３５ 文章 编 号 ： １ ０ — １ ６ ２ １ ） ２０ ２ —４ ０ ２３ ８ （ ０ ２ ０ —０ ７０ 　 Ｒａ ｉ 　 ｏ ｅ ｕ ａ 　 ｄ ｎｔｆｃ ｔｏ 　 ｆ Ｔｒ ｇｏ ｒ ａ ｇｌ ｂ ｕ ｐ ｄ Ｍ ｌ ｃ ｌ ｒ Ｉ ｅ ｉ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ 　 ｏ ｄｅ ｍ 　 ａ ｒ ｍ　 ｎ 　 ａ ｄ Ｔ ｏ ｏ ｅ ｍａ ｖ ｒａ ｉｅ Ｃｏｅ ｐ ｅ ａ： ｒ ｓｉａ ） ｒ ｇ ｄ ｒ 　ａ ｉ ｂ ｌ （ ｌｏ ｔｒ Ｄｅ ｍｅｔｄ ｅ　 Ｌ Ｕ　 ｎ 　 ＪＡＮＧ　 ａ ｇ ， Ｉ Ｃｏ ｇ ， Ｉ Ｘｉｎ 孙 ＦＡＮ　 ｕｊａ ｇ ， ＡＮＧ　 ｎ ｇ ｏ ， Ｗ —ｉｎ 。 Ｗ Ｘｉ— ｕ 　 ＬＵ　 ｎ —ｉ， Ｙｉｇ ｚ。　 ＬＩ Ｈｕ—ｉｏ ， Ｕ　 —ｏ ｇ ， Ａ　 ａ— ｕ 　 ＢＡＮ　 — ｉｇ　 Ｎ　 ｉ ａ 。 ＬＩ Ｅｒｌ ｎ 　 ＸＩ Ｌ ｉ ｎ ， ｊ ｑ Ｌｉ ｎ 。 ｐ （ ＿Ｃｏｌｇ 　 ｆＡｇ ｉｕｔｒ　 ｎ 　 ｉｔｃ ｎ ｌｇ １ ｌ ｅｏ　 ｒｃ ｌｕ ｅａ ｄ Ｂ ｏｅ ｈ ｏｏ ｙ，Ｃｈｎ 　 ｒ ｕｔ ｒ ｌ ｉｅｓｔ ｅ ｉａＡｇ ｉ ｌｕａ　 ｃ Ｕｎｖ ｒ ｉ ｙ，Ｂ ｉｎ 　 ０ １ ３ ｅｊ ｇ １ ０ ９ ，Ｃｈｎ ； ｉ ｉａ　 ２ Ｈ ｕ ｎ ｐ 　 ｎ ｒ — ｉ Ｉ ｓ ｅ ｔ ｎ ａ ｄＱｕ ｒｎ ｉｅＢ ｒａ ． ａ ｇ ｕ Ｅ ｔｙ Ｅｘｔ ｎ ｐ ｃｉ 　ｎ 　 ａａ ｔ 　 ｕ ｅ ｕ，Ｇｕ ｎ ｚ ｏ 　 ｏ ｎ ａ ｇ ｈ ｕ，５ ０ ３ １ ７ ０，Ｃｈｎ ； ｉａ　 ３ ．Ｃｏｌｇ 　 ｆＡｎｍａ　 ｃｅ ｃ ￣ Ｔｅ ｈ ｏｏ ｙ，Ｃｈｎ 　 ｒｃ ｌ ｒｌＵｎｖ ｒ ｉ ｌ ｅｏ　 ｉ ｌ ｉｎ ｅ ｅ Ｓ ｃ ｎ ｌｇ ｉａＡｇ ｉｕｔ ａ　 ｉｅ ｓｔ ｕ ｙ，Ｂ ｉｎ 　 ０ １ ３ ｅｊ ｇ １ ０ ９ ，Ｃｈｎ ） ｉ ｉａ　 Ａｂｓ