版教学课件辽宁省黑山县第一高级中学高二生物选修一《大肠杆菌的培养和分离》课件.ppt

2.稀释涂布法: (1)系列稀释操作: * 涂布平板操作 提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。 讨论:涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 返回 * 返回 菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 不同的细菌的菌落特征不同 菌落是鉴定菌种的重要依据。 * (2)碳源 可作为碳源的物质有: 含碳无机物: 、 、 含碳有机物： 蛋白质 脂肪酸 返回 不同微生物所利用的碳源不同 异养型微生物的碳源为 自养型微生物的碳源为 碳酸盐 碳酸氢盐 二氧化碳 糖类（主要） 含碳有机物（有机碳） 含碳无机物（无机碳） * (3)氮源 可作为氮源的物质有: 含氮无机物： 、 、 、 含氮有机物： 蛋白胨 牛肉膏 尿素 返回 固氮微生物所利用的氮源是 氮气 氨气 硝酸盐 氨盐 氮气 * . * 实验目的： 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。 2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基本进行细菌的划线培养。 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。 * 一、基础知识 (一)微生物: 1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用. 2.微生物包括五类 病 毒 细 菌 放线菌 真 菌 原生动物 * (二)培养基 1.分类(按物理形态分) (1)液体培养基 (2)固体培养基 常用的固体培养基: 琼脂固体培养基. ②微生物在固体培养基 表面生长,可以形成 肉眼可见的菌落. * 2.培养基内所含的基本物质 (1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机盐 * (1)pH值 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性 (2)特殊营养物质---- ? 如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素 (3)氧气的含量 如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件 3.培养基内所需的其他条件 生长因子 * (三)无菌技术 1、获得纯净培养物的关键: 2、无菌技术 的四个方面(参看教材20页) 3、消毒与灭菌 (1)消毒： 概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢和孢子吗？ 方法: 煮沸消毒法 巴氏消毒法:如牛奶的消毒 化学药剂消毒:酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等 紫外线消毒 (不包括芽孢和孢子) 防止外来杂菌的入侵 * （2）灭菌 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧 注意适用范围 * 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h 能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿) 高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min 通常用于培养基的灭菌 * 二、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板 （二）纯化大肠杆菌 接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 （三）将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h和24h后，观察并记录 * 三、课题延伸：菌种的保藏 1、斜面保藏 （临时保存） 2、甘油保藏 （长期保存） * 实验1：大肠杆菌的培养和分离 设备及用品： 灭菌锅或高压锅、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈、直径90mm的培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有酒精棉球的广口瓶、镊子、有棉塞的试管（15mm×120mm）5支 实验材料： (1)50mlLB液体培养基：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、NaCl 0.5g、加水50ml。 (2)大肠杆菌菌种斜面 (3)空白斜面 * 实验步骤 (1) 灭菌：将配制好的50mlLB液体培养基和50mlLB液体培养基分别装入两个250ml 的三角瓶中，加上封口膜，用高压锅进行灭菌。 (2) 制平板：在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个培养皿中，使培养基铺平皿底部，待凝，使之形成平面。 (3)接种扩大培养：靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到三角烧瓶的液体培养基中，三角烧瓶在37℃