尿中磺酸化胆汁酸的流动注射固定化酶化学发光法.pdf

维普资讯 第29卷 分析化学 (FENX]Hu^xuE) 研究简报 第 l0期 2(]01年 10月 cl曲eBeh盯l810f^n日 c cI· 曲 l154一ll56 尿中磺酸化胆汁酸的流动注射固定化酶化学发光法 高秀峰q 李永生 轻部征夫 (北华大学医学院医学检验系．吉林 132011) (东北电力学院应用化学系．吉林 132012) (东京大学先端科学技术研充中心，日本 153) 摘 要 肝胆系统有疾患，会导致屎中磺酸化胆汁酸浓度的增加。根据尿中磺酸化胆汁酸的浓度可 以 判断肝脏机能是否正常。基于流动注射分析原理，利用化学发光法和固定化酶反应 ，建立了一个新的尿 中磺酸化胆汁酸的临床快速分析法。进样量为20 ；分析速度3o样 ／h．检出限为0．1J岫 几；RSD小于 2．2％；线性范围在0．1—12vnml／L之内。 关键词 流动注射分析，磺酸化胆汁酸，化学发光，固定化酶 1 引 言 胆什酸在肝脏内合成，而磺酸化胆汁酸(鲺ltedbileacids：s8A)是磺酸基在类固醇骨核的 位上 和酯键结合生成的磺酸酯。胆汁酸由于被磺酸化，水溶性显著增加，经肾脏的排泄可增加到数倍或数百 倍 。正常时SBA存在于肠肝循环内，尿中的含量很少。如果肝胆系统有疾患．将会导致尿中SBA浓 度的增加 。因此．根据尿中SBA浓度的大小可以判断肝胆机能是否正常。 目前报道了一些测试方法0 ，但都难以达到准确、快速、简便的临床要求。因此，我们将流动注射 分析技术 (viA)0和酶反应结合，成功地开发了一个能准确、快速、简便测定尿中SBA的高灵敏度新方 法。 2 实验部分 2．1 试剂、试液配制及仪器 所用试剂．试液配制及仪器见文献 。 2．2 测定过程 本实验流程如图1所示。首先．SBA标准样注入载流并进入固定化酶反应柱；试样在固定化胆什酸 图 1 攫I定磺酸化胆汁酸的FIA固定化酶发光分析系统 Fig-1 l岫 聆cIm flow ∞ 跚al (m ) Ⅻ far l缸edbileacids(SBA)with immobliizedenzymereactor 磺酸酯酶(Bileseidsul缸esu~k,me，Rss)催化作用下先水解成p-羟基甾醇．羟基甾醇又在固定化 3羟 2000-11-20收穑；∞01．O 28接受 维普资讯 第 1O期 高秀峰等：尿中磺酸化胆汁酸的流动注射固定化酶化学发光法 基甾醇脱氢酶(3阻HsD)的催化作用下和载流中NAD 反应变成 3-甾酮；同时，NAD 变成 NADH；NADH 在溶解氧共存下叉和载流中一 甲基吩嚎二 甲酯(I-MPMS)反应，产生过氧化氢 ；含有过氧化氢的试样带 和鲁米诺试荆汇合，在过氧化物酶(APR：fromarthromyeesmm∞Ilspero：ddaxe)的催化作用下发光并进人流 通池；其发光量由光计数检测器检出。 3 结果与讨论 3．1 酶反应的稳定性 用 10,umollLSBA作为标准试样，对固定化酶的反应稳定性进行了考察。连测25天，每次样品连续 测定 lO次左右，其相对标准偏差为 1．1％ 3．7％，BSS和HSD酶的反应活性维持在3周左右。 3．2 1-MPMS浓度的优选 把载流中NAD 浓度固定在200tmxd／L，在0—4o,mr~l／L的范围内改变 1-MPMS试剂的浓度，对其最 佳浓度进行了考察。结果是 1-MPMS试剂的浓度在5,mr~l／L时灵敏度最高。所以，1-MPMS试剂的浓度 选为 5~mol／L。 3．3 NAD’浓度的优选 把 1-MPMS试剂的浓度固定在5m,r~l／L，在0—60tmaol／L的范围内改变NAD 浓度，考察其浓度变化 对灵敏度的影响。结果发现：NAD浓度在50m,r~l／L时灵敏度最高。所以，本方法选定 NAD浓度为50