枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及突变 - 黄金科学技术.pdf

遗 传 学 报， （ ）： ， = ’% ’’’’ b ’’’$ %##% %’- ./0/-(’ 1(0(’ 枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及 突变株! #$% 基因的克隆和序列分析 ! 苗丽霞，曹军卫 ，刘瑞杰，王友亮，曾永辉 （武汉大学生命科学学院生物技术系，武汉 !##$% ） 摘要：利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌 进行诱变处理，获得了耐 浓度达 髎的突变株，同时发现该突变 ’(’ )*+, ’! 株也是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株。其胞内自由脯氨酸的含量随着盐浓度的提高显著增加，说明其对渗透压 的耐受能力与胞内自由脯氨酸的含量紧密相关。利用-+. 方法克隆突变株的! #$% 基因，得到一个约% /01 的 2)3 片段，序列分析表明该片段含有一完整的! #$ 基因和部分! #% 基因。与野生菌株的! #$ 基因相比，突变株 基因中有 个碱基发生了改变，其中一个碱基的变化（从起始密码子开始第 位由 ）导致了一个氨基酸 ! #$ $4’ 5!3 发生改变（ ），另外两个碱基变化为沉默位点突变。将该 基因转入大肠杆菌脯氨酸营养缺陷型菌株，能 678!598 ! #$ 够与其功能互补。同时对部分! #% 基因序列分析发现，其与! #$ 基因头尾重叠，在! #% 基因起始密码子上游第 个碱基处有一个类似于 的序列，其所编码的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌 的同源性为 髎 ’! 62 ’:4 $$ 关键词：枯草芽孢杆菌；突变； 基因 ! #$% 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） ;$( 3 #$ !’$% %##% ’% ’’’’ #$ !#$%$ ’$( )*+,*$-%$ #. /0* !#$% 1*$* .2#3 /0* )**-/*( 4,/’$/ 5*6%6/’$/ /# 72#%$* 8$’#,* .2#3 $’())*+ +*,-()(+ ! ， ， ， ， =3? @ABCA* +3? DEFBG7A @H .EABDA7 G3)I JKEB@A*FL MN)I JKFLBOEA （ ， ， ， ， ） ’!()*’+) #, -’./+#0#12 3#00’1’ #, 45, ’ 6.5’+.’ 78/(+ 9+5:’;5)2 78/(+ !##$% 3/5+( ：