性连锁性遗传病植入前诊断的临床前运用研究.pdfVIP

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2017-07-24 发布于北京
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性连锁性遗传病植入前诊断的临床前运用研究.pdf

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性连锁性遗传病植入前诊断的临床前运用研究.pdf

实用预防医学2005年10月 Preventive 1047 第12卷第5期PracticalMedicine，oct2005，vol12，No．5 图l活检前胚胎图2单卵裂球的吸取图3单卵裂球的吸取图4单卵裂球与活检后胚胎加人15 mMTris nml01·L ul石蜡油。立即进行碱裂解或于一80℃冻存待用。以prnOl，10 8．3)，2．5～4．5 HCL(pH Mg(、1二，此方法共吸取了单卵裂球34枚。 1．4碱裂解缓冲液的准备及细胞裂解碱裂解缓冲液(20096℃预变性15 min，接下来10个循环，每循环96℃变性2【)s， mmd·L1 55℃退火20 KOH，50mm01·L。UrT)12’副以每管100“1分装冻s，72℃延伸35s，后25个循环，每循环94o【、变性 20s，55℃退火30s，72℃延伸40 存于一20℃待用，避免反复冻融，且每管均为解冻后一次性使 s。次级反应体系为25『』l：1 用。使用时，吸取5肛1裂解缓冲液于0．2ml薄壁PCR管中，加表1·『生别鉴定巢式引物表入细胞及石蜡油后，离心后于65℃加热10min，反应终止加入 mmo卜L。1 5肛l中和液(200 tricine)中和，行PCR或80℃冻存待用。 1．5 巢式PcR在x／Y染色体上设计性别识别位点Ameloge— nin的巢式引物，同时在5号染色体上设计IL3基因的巢式引物进行共扩增。初级P(、R的引物分别为AmeloFOr、AmeloReS —l和IL3Res、IL一3For一1，次级PCR的引物分别为Amelo Res、IL一3 For、AmeloRes一2和IL一3FOr一2。序列见表1。 Amelogenin的初级产物，在Y染色体上为188 bp，在x染色体上为182 bp；次级产物，在Y染色体上为112bp，在x染色体上为106bp。IL一3基因的初级产物为392bp，次级产物为151 bp。PcR初级反应体系为25出：细胞裂解样品约10肛l，0．2 mmol·L。dNTPs，luH。tstar p01ymerase，正反向引物各10