介导分泌表达猪圆环病毒 2型Cap蛋白的 重组杆状病毒的构建.PDF

第３４卷 第４期 华南农业大学学报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．４ 　　　　　　　　　　 　　 　　　　　　　　 ２０１３年１０月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｃｔ．２０１３ 介导分泌表达猪圆环病毒２型 Ｃａｐ蛋白的 重组杆状病毒的构建 张春雷，靳立明，叶　昱，张　杰，朱　俊，高又文，廖　明，樊惠英 （华南农业大学兽医学院，农业部兽用疫苗创制重点实验室，广东广州５１０６４２） ＴＭ 摘要：应用杆状病毒表达系统，将猪圆环病毒２型ＯＲＦ２基因插入供体质粒ｐＦａｓｔＢａｃ ＤｕａｌｐＨ启动子控制下的多 克隆位点，引入ＥＧＴ信号肽取代ＯＲＦ２原有核定位信号肽以实现在昆虫细胞中分泌型表达，并在Ｃ端融合６个组 氨酸标签以便于后期的纯化．将构建质粒转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞获得重组穿梭载体，提取重组Ｂａｃｍｉｄ质粒．将 阳性重组Ｂａｃｍｉｄ质粒转染Ｓｆ９昆虫细胞，７２ｈ收集培养上清液获得重组杆状病毒．间接免疫荧光试验和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明，该重组杆状病毒可以在昆虫细胞实现猪圆环病毒２型Ｃａｐ蛋白的分泌表达． 关键词：猪圆环病毒２型；ＯＲＦ２基因；ＥＧＴ信号肽；Ｃａｐ蛋白；重组杆状病毒 中图分类号：Ｓ８５２．６５　　　　　　文献标志码：Ａ　　　　　文章编号：１００１４１１Ｘ（２０１３）０４０５６４０５ ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＳｅｃｒｅｔｅｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒ ｉｎＣａｐＰｒｏｔｅｉｎｏｆＰｏｒｃｉｎｅＣｉｒｃｏｖｉｒｕｓＴｙｐｅ２ ＺＨＡＮＧＣｈｕｎｌｅｉ，ＪＩＮＬｉｍｉｎｇ，ＹＥＹｕ，ＺＨＡＮＧＪｉｅ，ＺＨＵＪｕｎ，ＧＡＯＹｏｕｗｅｎ，ＬＩＡＯＭｉｎｇ，ＦＡＮＨｕｉｙｉｎｇ （ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＶａｃｃｉｎｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ， ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｏｂｊｅｃｔｉｖｅｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｕｔｉｌｉｚｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓｙｓｔｅｍｔｏｅｘｐｒｅｓｓｃａｐｓｉｄ （Ｃａｐ）ｐｒｏｔｅｉｎ（ｉｎｓｅｃｒｅｔｅｄｆｏｒｍ）ｏｆｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ２．ＴｈｅｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇＣａｐｐｒｏｔｅｉｎｆｕｓｅｄ ＴＭ ｗｉｔｈａＣｔｅｒｍｉｎａｌ６ＨｉｓｔｉｄｉｎｅｔａｇｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｐＦａｓｔＢａｃ Ｄｕａｌｖｅｃｔｏｒｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆｐＨｐｒｏｍｏｔｅｒ．Ｔｈｅａｕｔｈｅｎｔｉｃｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｏｆｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２ＯＲＦ２ｗａｓｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅ ｅｃｄｙｓｔｅｒｏｉｄＵＤＰｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＥＧＴ）ｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅ．ＰｌａｓｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ ＤＨ１０ＢａｃｃｏｍｐｅｔｅｎｔｃｅｌｌｓｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｈｕｔｔｌｅｖｅｃｔｏｒＢａｃｍｉｄ．ＴｈｅＢａｃｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎ ｔｏＳｆ９ｃｅｌｌｓｔｏｐｒｏｄｕｃｅｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ．Ｉｎｄｉｒｅｃ