使用UHPLCQ-TOF联用系统测定抗体药物.PDF

使用UHPLC/Q-TOF 联用系统测定抗体药物 偶联物 的药物 抗体比率 (ADC) / (DAR) 应用简报 生物制药 作者 摘要 左帅 本文以半胱氨酸连接的抗体药物偶联物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) 为研究对 安捷伦科技（中国）有限公司 象，使用连接 PLRP-S 反相液相色谱柱的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统分离还 原的轻链、重链和相对应连接药物的轻重链，并通过 Agilent 6530 高分辨率四极杆飞 行时间 (Q-TOF) 液质联用系统对各个色谱峰进行鉴定。通过积分处理紫外吸收图谱中 各轻重链的峰面积百分比，结合各个峰的偶联药物数目，计算 的加权平均药物 抗 ADC / 体比率 (Drug to Antibody Ratio, DAR) 。同时使用了安捷伦DAR 计算器 (Agilent DAR Calculator) 对质谱解卷积结果进行 DAR 值计算，所得结果与紫外吸收图谱计算所得结 果相同。 前言 维布妥昔单抗是一类半胱氨酸连接的抗体药物偶联物 (Antibody-Drug Conjugate, ADC) ， 抗体通过部分还原使链间二硫键转换成游离的半胱氨酸残基，半胱氨酸残基再与小分子 药连接形成了一种包含 [1] 个药物复合抗体的混合物，如图 所示。 0-8 1 反相液相色谱条件 色谱柱： PLRP-S 色谱柱，2.1 X 50 mm ，5 µm ，1000 Å (PN: PL 1912-1502) 1. 流动相： A ：100% 水，含0.1% 甲酸和0.025% 三氟乙酸 2. B：100% 乙腈，含0.1% 甲酸和0.025% 三氟乙酸 流速： 0.25 mL/min 8 梯度： 时间 (min) %B 0 27