最适补充维生素A蔬菜的选择及β-胡萝卜素保存条件研究.pdf

生物化学实验甲自主设计实验与实践课题论文集（2010－2011 学年秋冬学期）（甲－4 班） 最适补充维生素A 蔬菜的选择与β-胡萝卜素保存条件研究 1 2 2 宋立江 詹宇雯 詹倩 （浙江大学2009 级1. 竺可桢学院巴德年医学班，2.应用生物科学专业） 摘要：本实验旨在比较甜椒和胡萝卜中β-胡萝卜素（维生素A 二聚体）的含量，为日常生活中补充维生素 A 提供一种更合适的选择。同时，通过检测β-胡萝卜素的还原性，对纯品的保存提供一些建议。本实验通 过粉碎、离心、分液、吸附层析和吸光度、光谱测定等手段，进行β-胡萝卜素的提取、纯化、检测和鉴定。 由实验可知，胡萝卜中β-胡萝卜素的含量较甜椒更高。甜椒中可能存在β-胡萝卜素的两种存在状态。β- 胡萝卜素还原性较弱，正常条件下氧化速度缓慢。 关键词：β-胡萝卜素；含量；还原性 引言：维生素作为生物体必需的七种物质之一，它的生理功能功效越来越为人们所重视。为 了满足自身对维生素的需求，市场上形形色色的维生素片剂成了人们最好的选择。但是，不 可否认，人工生产的药品都会存在一定的毒副作用，对身体有一定损害。因此，食疗作为一 种比较科学的补充维生素的方式，逐渐进入了人们的视野。蔬菜世界缤纷多彩。可是，人们 对于补充维生素A 的食物种类了解很有限。为了更好地知道不同蔬菜维生素A 的含量，指导 人们更好地利用食补完成维生素A 的摄取，我们将对胡萝卜与甜椒中的β-胡萝卜素进行提 取和含量测定。由于β-胡萝卜素中含有较多双键，因此易被空气氧化，不易长时间保存。 在生活中，保存方法比较单一，没有根据需要保存时间的不同而适当简化。我们的实验旨在 根据其还原性的强弱而适当纠正保存方法。 我们的实验主要分成三步，即β-胡萝卜素的提取、含量测定与还原能力的测定。由于 维生素A 存在的主要形式为β-胡萝卜素，因此我们先破碎组织提取β-胡萝卜素，再采用层 析柱吸附层析处理β-胡萝卜素，纯化样品。而后，利用比色法进行含量测定。先测定标准 β-胡萝卜素溶液的吸光度继而得到标准曲线，然后测出各样液的吸光度，确定其浓度，从 而比较得到适宜的补充β-胡萝卜素（维生素A）的蔬菜。通过高锰酸钾与标准β-胡萝卜素 溶液反应，检测两者的反应能力，确定β-胡萝卜素还原性的强弱。 1．实验材料和方法 1.1 实验材料 实验材料： 胡萝卜、甜椒 实验试剂：石油醚丙酮溶液（按7:3 混合）、中性氧化铝 103 宋立江、詹宇雯、詹倩：最适补充维生素A 蔬菜的选择与β-胡萝卜素保存条件研究 实验仪器： 紫外分光光度计、搅拌机、电子天平、刀、离心管（50mL、7mL）、离心机、微量移液枪（1mL）、 层析柱、固定装置（铁架台、铁夹） 1.2 试验方法 1.2.1 β-胡萝卜素的提取 取新鲜的胡萝卜和甜椒洗净，擦干表面残余的水分。用天平各称取约40g 的样品，0.25g 碳酸钙与20mL 水混合后，分别在搅拌机中搅拌约 1min。 将液体和固体残渣一起转移到四个50mL离心管内，用适量的去离子水洗涤搅拌机内壁， 将洗涤液同样转移到上述四根离心管中。用量筒量取约 10mL 的石油醚丙酮溶液加到离心管 内，上下颠倒多次震荡摇晃，使溶液混合均匀。用12000r/min 的速度高速离心 10min，取 上层有色液体，加入7mL 离心管中（每管约3-4mL），再加入2mL 去离子水，震荡充分。用 12000r/min 的速度高速离心5min。重复操作两次，得到橙黄色溶液。用紫外分光光度计先 检测溶液中物质处于最大吸收值时的波长，判断此时溶液的纯度。 以中性氧化铝为固定相制作层析柱，石油醚丙酮溶液为流动相，对上述收集液进行层 析分离。收集各颜色层的分离物。 用紫外分光光度计检测溶液中物质处于最大吸收值时的波长，记录数值，并判断制取 物质是否为β-胡萝卜素以及其纯度，并与前面的值作比较，得出层析步骤的分离效果。 1.2.2 样品β-胡萝卜素含量的检测 取标准β-胡萝卜素2.5mg，用三氯甲烷稀释成5mL 溶液。取样液 1mL 溶于4mL 三氯甲 烷。以此类推，最后制的 1ug/mL、2ug/mL、3ug/mL、4ug/mL、5ug/mL 的标准溶液待用。 取样品提取液，包括甜椒三层溶液和胡萝卜提取液，分别稀释：甜椒 I 号×1