常见植物病毒冷冻干燥方法的改进与效果观察1999.pdf

第 18 卷 第2 期 华　中　农　业　大　学　学　报 Vol.18　No.2 1999 年　4 月 Journal of Hua hong A gricultural University Feb.　1999 研究简报 常见植物病毒冷冻干燥方法的改进与效果观察＊ 熊克娟　李天宪　陈 亮　张　忠　刘汉新 (中国科学院武汉病毒研究所, 武汉 430071) IMPROVEMENT AND EFFECT OF LYOPHILIZATION FOR COMMON PLANT VIRUSES Xiong Kejuan 　Li T ianxian 　Chen Shengliang 　Zhang Zhong 　Liu H anxin (Wuhan Institute of Virology Acadmia Sinica, Wuhan 430071) 关键词　植物病毒;保藏;氯化钙;冷冻干燥 KEY WORDS　plant virus, preservation, CaCl2, lyophili ation 中图法分类号　S 432.4 1 　　在植物病毒研究中, 病毒毒源的保藏是很重要 理:第1 类为病叶加氯化钙, 毒源包括所有的供试病 的一环。保藏的目的不仅要维持病毒的侵染性, 还 毒(表1);第2 类和第3 类分别为病毒粗提液(不加 [ 1] 要使病毒不产生变异和污染混杂 。在国外对植 任何保护剂)和病毒粗提液加保护剂(7%蛋白胨和 [2, 3] 物病毒的保存方法和效果的研究较多 , 而国内 7%葡萄糖)。毒源均为黄瓜花叶病毒(CMV, 球 则少见报道。本试验采用冷冻干燥法对我国常见 状)、烟草花叶病毒(T MV, 杆状)、马铃薯病毒 Y 20 多种植物病毒长期保存的效果进行了观察, 并在 (PVY, 线状)。 毒源保藏处理方面进行了适当改进。 1)制备病毒粗提液。将感染叶片放入pH 7 适 1　材料与方法 量的P.B.S 缓冲液中研磨, 4 层纱布过滤。去滤渣, 1.1　毒源 滤液经4 000 r/min 离心30 min, 去沉淀, 上清液装 供试植物病毒均由中国科学院武汉病毒研究所 入玻璃管。 病毒保藏室提供, 其名称及寄主详见表1。 2)病毒粗提液加保护剂。将上述病毒粗提液按 1.2　病毒繁殖 等体积加入7%葡萄糖和7%蛋白胨混合液作保护 将毒源置于防虫温室22 ～28 ℃下进行隔离活 剂, 摇匀后装入玻璃管。 化繁殖, 所用花盆和土均经高压灭菌2h, 以防止土 3)感病叶片加干燥剂。将感染显症上位嫩叶片 传和蚜虫传毒交叉感染, 每盆寄主植物栽3 ～4 株, 在上位叶1～4 片叶上以汁液擦接种病毒, 经感染显 去主叶脉, 将叶组织剪成细丝状, 迅速放入装有颗粒 症后, 剪取病嫩叶作毒源保藏材料。 状无水CaCl2 注射针盒容器中, CaCl2 体积占溶积一 1.3　毒源保藏前处理[ 4] 半以上, CaCl2 上垫4 层无菌纱布, 然后均匀放入细 将病毒毒源分成3 类并按不同的方式进行处 条状病叶, 容器加盖并用胶布密封。 收稿日期:1998 12 09 ＊中国科学院重点课题资助项目 熊克娟, 女, 1955