温度敏感型UNG酶(TS-UNG)使用说明.pdf

温度敏感型UNG酶 （TS-UNG）使用说明 货号：U8170 规格：1U/μl 保存：保存于-20℃。并避免保存时反复冻融。 产品介绍: TS-UNG （Temperature Sensitive UNG）是经大肠杆菌重组表达获得的温度敏感型UNG 酶。 该酶能够催化含尿嘧啶的单链和双链DNA 释放游离尿嘧啶，对RNA 无活性，主要应用于PCR 扩增中防止产物污染。TS-UNG 酶与E.coil 基因来源的常规UNG 酶相比，对温度敏感、易 于灭活，避免了常规UNG 酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dUTP 扩增产物的降解 作用。TS-UNG 酶可以在20℃~37℃，5~10min 反应，以消化含dUTP 的模板；然后，在50℃ 10min 或95℃ 2min 进行灭活。 利用TS-UNG 酶低温消化、易于灭活的特性，它可以很好地与RT-PCR 扩增反应程序相匹配， 从而应用于反转录扩增防止产物污染。 活性定义：37℃条件下，1小时降解 1µg含dU碱基的单链DNA 的酶量为1单位。 储存缓冲液： 20mMTris-HCl，100mMNaCl，0.1mMEDTA，1MmDTT，0.1%TritonX-100，50%glycerol， pH 7.5 反应条件： 1、 反应体系: Volume per Concentration in Master Component Reaction （μl） Mix Template * 1μg/reaction Primer 1 1~5 0.2~1.0μM Primer 2 1~5 0.2~1.0μM d NTPs * 200μM （dATP、dGTP、dCTP） d UTP * 400μM (replace dTTP） 10×PCR Buffer 5 1× 25mM MgCl2 2~8 1.0~4.0mM Taq （5U/μl） 0.25 1.25U 0.5 0.5U TS-UNG （1U/μl） (0.1-0.5) (0.1~0.5U) HO2 * —— Total volume 50μl 2、 Incubate the product for 10min at 37℃； 3、 Inactivate TS-UNG by heating to 50℃ for 10min， or 95℃ for 2min； 质量控制： 1、 SDS电泳纯度大于98%； 2、 降解活性、批间差异、稳定性；