生物化学实验项目.doc

实验项目一 蛋白质等电点测定 【实验目的】 1．验证蛋白质的两性电离和等电点。 2．掌握测定酪蛋白等电点的原理和方法 【实验用品】 器材：试管、试管架、刻度吸管（0.5 ml、1ml、5 ml）、吸耳球、记号笔。 试剂： 1．0.01mol/L乙酸 2．0.1mol/L乙酸 3．1mol/L乙酸 4．5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 称取纯酪蛋白0.25g，加入蒸馏水20 ml及1.0mol/LNaOH5ml，混合，至酪蛋白完全容易。然后加入1.0mol/L乙酸5 ml，移入50 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。 【实验原理】 蛋白质分子中既含有酸性基团（如—COOH），又含有碱性基团（如—NH2、胍基等） 素质 要求 10 工作衣帽穿戴整齐--5 回答问题语言清晰流畅--5 操作 前 准备 10 复习与实验有关的理论内容--5 能简述出本次实验的名称、操作要点、预期结果--5 操作 过程 及 实验 报告 70 称取纯酪蛋白0.25g--5 加入蒸馏水20 ml及1.0mol/LNaOH5ml，混合，至酪蛋白完全溶解。--10 加入1.0mol/L乙酸5 ml，移入50 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。--10 取干净试管5支，编号加入各种试剂--10 立即混合各管，静置10分钟，观察各管沉淀情况，记录于表中--10 随时分析实验中出现的问题，并提出解决方案--5正确书写实验报告--5 记录实验数据、分析实验结果--10 正确回答实验指导中的问题--5 操作 后 要求 10 清理实验物品、妥善处理废弃物—5 消毒洗手—5 合计 100 学生互评结果得分（乘以0.3系数） 教师评价结果得分（乘以0.7系数） 最后综合得分 实验项目二 温度、pH对酶促反应的影响 【实验目的】 通过观察不同的温度、pH条件下，唾液淀粉酶对淀粉的作用，了解温度、pH对酶促反应的影响。 【实验原理】 唾液淀粉酶可催化淀粉水解，生成分子大小不同的糊精、麦芽糖和少量葡萄糖。由于在不同的温度、PH条件下，淀粉酶的活性不同，使淀粉水解的程度也不一样，因而遇碘后会产生不同的颜色，根据颜色的不同，可判断淀粉水解的程度，从而了解温度、PH对酶活性的影响。 淀粉 淀粉酶 糊精 淀粉酶 麦芽+葡萄糖 加碘液 （呈蓝色） （呈紫色） （呈黄色，为碘本身颜色） 【实验用品】 试剂：1、1%淀粉溶液 取可溶性淀粉1g，加5mI蒸馏水调至糊状， 再加蒸馏水80mI，加热使其溶解，然后加水至100mI. 2、稀碘溶液 取碘2g ，碘化钾4g，溶于1000mI蒸馏水中，置棕色瓶中贮存。 3、缓冲液 （1）pH3.0缓冲液：取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液205mI，0.1mo/L柠檬酸溶液795mI，混合后即得。 （2）pH8.0缓冲液：取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液772mI，0.1mo/L柠檬酸溶液228mI，混合后即得。 （3）pH8.0缓冲液：取0.2mo/L磷酸氢二钠溶液972mI,0.1mo/L柠檬酸溶液28mI，混合后即得。 器材 ： 10mm×100mm试管、试管架、蜡笔、恒温水浴、沸水浴、冰浴。 【实验方法】 稀释唾液制备：用自来水漱口以清除口腔内的食物残渣。再含一口蒸馏水，作咀嚼运动，2分钟后吐入小烧杯中， 然后用滤纸过滤后备用。温度对酶促反应的影响 取3支试管编号，然后按下表操作。 管 号 pH6.8缓冲液（滴） 1%淀粉溶液（滴） 放入不同温度 1 20 10 37水浴 2 20 10 沸水浴 3 20 10 冰浴 以上各管放置5分钟，各加入稀释唾液5滴，仍放回原处。 10分钟后，在各管中加入稀释碘溶液1滴，观察各管颜色变化。 pH对酶促反应的影响 取3支试管编号，按下表操作。 管 号 pH3.0缓冲 pH6.8缓冲 pH8.0缓冲 1%淀粉溶 稀释唾液（滴） 液（滴） 液（滴） 液（滴） 液（滴） 1 20 一 一 10 5 2 一 20 — 10 5 3 一 一 20 10 5 将各试管摇匀放入370C水浴中保温。 10分钟后，在各试管中加入稀碘液1滴，观察各试管颜色变化。 【注意事项】 注意不同人在不同的时间所釆集的唾液中唾液淀粉酶活性不同，而使结果有所差异，若想得到满意的结果，应事先确定稀