Photometry）是一种基于物质对光的选择性吸收而建立起来.ppt

三、仪器和药品 仪器 721型分光光度计（722型分光光度计）容量瓶8个（50mL），10mL移液管（有刻度）1支，5mL移液管（有刻度）1支，5mL量筒1个，500mL烧杯1个，洗瓶1个，洗耳球1个，小滤纸，镜头纸。 药品 （1）铁标准溶液（100 ） 准确称取0.8634g铁盐NH4Fe(SO4)2·12H2O，置于烧杯中，加入20mL 6mol/L HCl和少量水，溶解后，定量转移入1L容量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀。 （2）铁标准溶液（10 ） 用移液管移取上述标准溶液10.00mL，置于100mL容量瓶中，加入6mol/L HCl 2.0mL，然后加水稀释至刻度，充分摇匀。 （3）10%盐酸羟胺溶液（新配制） （4）0.1%邻二氮菲溶液（新配制） （5）HAc-NaAc缓冲溶液（pH≈5.0）。称取136g NaAc ，加水使之溶解，在其中加入120mL冰醋酸，加水稀释至500mL 。 四、内容及步骤 1、邻二氮菲-Fe2+ 吸收曲线的绘制 用吸量管吸取铁标准溶液（10 ） 0.0、2.0、4.0mL分别放入50mL容量瓶中，加入1mL 10%盐酸羟胺溶液、2.0mL 0.1%邻二氮菲溶液和5mLHAc-NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置5min，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比溶液（即在0.00mL铁标准溶液中，加入相同试剂），在721分光光度计中，在420～600nm波长范围内分别测定其吸光度值。在临近最大吸收波长处应间隔波长5～10nm测其A值，其他各处可间隔波长20～40nm测其A值。然后以波长为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长，以 表示。 2、标准曲线的绘制 用吸量管吸取铁标准溶液（10 ） 0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、1.0mL（10 ）分别放入7支50mL容量瓶中，分别依次加入1mL 10% 盐酸羟胺溶液、稍摇动。加入2.0mL 0.1%邻二氮菲溶液和5mL HAc-NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀。放置5min后，用3cm比色皿，以不加铁标准溶液的为参比溶液，选 为测定波长，测其A值，以铁含量为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，绘制标准曲线。 3、试样分析 （1）水样分析 取3支50mL容量瓶，分别加入5.00mL(10mL ，铁含量以在标准曲线范围内为合适)未知试样溶液，按实验步骤2的方法显色后，在 处用3cm比色皿，以试剂为参比液，平行测定A值。求其平均值，在标准曲线上查出铁的质量，计算水样中铁的含量。 五、思考题 1、邻二氮菲分光光度法测定铁时，为何加入盐酸羟胺溶液？ 2、邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？ 3、简述722型分光光度计的主要结构，测量时应注意什么？ 植物中可溶性还原糖的测定 一、目的要求 1.学会用3，5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性还原糖的含量。 2.学会721型分光光度计的使用。 二、仪器与试剂 仪器 分析天平，721型分光光度计，比色皿，大试管，水浴锅，纱布或滤纸，容量瓶（100ml），小烧杯，剪刀或研钵，比色管，移液管（1ml、2ml），量筒（25ml），坐标纸。 试剂 3，5-二硝基水杨酸（DNS试剂），葡萄糖（105℃干燥至恒重，分析纯），辣椒或黄瓜。 三、方法原理 721型分光光度计采用自准式光路，单光束结构，其波长范围为360～800nm。用钨丝白炽灯泡作光源，其光学系统如图16-1所示： 图16-1 721型分光光度计光学线路示意图 1.光源灯（12V25W）2.聚光透镜3.色散棱镜4.准直镜5.保护玻璃6.狭缝7.反射镜8.聚光透镜9.吸收池　　10.光门板11.保护玻璃12.光电管 3，5-二硝基水杨酸与还原糖共热后，被还原成红色的氨基化合物，在一定的范围内，还原糖的量与棕红色的深浅成正比关系，可用比色法测定糖的含量。 本法操作简便，快速，杂质干扰较小。 四、操作步骤 1.葡萄糖标准溶液配制 准确称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1000mg，溶于水后，定容至100ml，摇匀，备用。 2.样品中可溶性还原糖的提取 准确称取1.9000～2.0000g新鲜辣椒（或4.9000～5.0000g黄瓜）1份。剪碎或研碎，放入大试管中，加水20ml，在沸水中加热，提取20min，冷却后过滤（用纱布过滤）入100ml 容量瓶中（若浸提液颜色深过滤到小烧杯中，再用快速滤纸过滤一遍），水洗残渣2～3次，定容至刻度备用。 3.标准曲线的制定 （1）取7支比色管，编号后按下表加试剂，由浓到稀配