试验一生物化学试验基本操作及蛋白质的定量测定.PPT

实 验 一 生物化学实验基本操作 及蛋白质的定量测定（双缩脲法） 实? 验? 须? 知 一、实验目的 1. 进行生物化学基本技能的训练。 2. 验证部分基本原理。 3. 培养科学思维方法以及独立分析问题和解决问题的能力。 实? 验? 须? 知 二、实验要求 1. 课前预习，明确实验目的。 2. 严格操作规程，动手、动脑、做好实验。 3. 如实记录实验数据与结果，写好实验报告，交教师批阅。 实? 验? 须? 知 三、试剂使用 1. 仔细辨认标。 2. 吸量管与所需试剂号码务必对准。 3. 用后盖好瓶塞（切勿张冠李戴）归还原处，以免影响他人使用。 实? 验? 须? 知 四、实验室规则 1. 穿工作服进入实验室，不迟到，不早退。 2. 不高声说话，严禁用器械及动物开玩笑。 3. 严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用。 4. 节约试剂，节约水电。 5. 实验完毕，洗净所用器材，固体舍弃物(如用过的滤纸、电泳用凝胶条等)切勿倒入水槽内，以免堵塞！ 6. 值日生负责实验室卫生，倒尽垃圾，关好水、电、门窗，经教师检查后方可离开。 实验报告的书写 实验是理论指导下的科学实践，对培养科学思维、分析判断和解决实际问题的能力是很好的训练。为了做到心中有数，实验前要将有关实验内容及理论依据进行预习。 实验中应一丝不苟，培养自己严谨的科学作风。对实验的结果、现象和数据，应毫不虚假的记录之，字迹要清楚、整洁。 实验报告的书写 实验完毕则应书写实验报告，其内容应包括下列项目： 1. 实验日期及实验名称。 2. 扼要叙述实验原理及目的要求，用自己的语言表达，不能照抄。 3. 操作步骤要简明扼要，或用箭头表示，尽量设计一定的表格填写，使人一目了然。? 4. 实验结果、现象、数据进行记录、计算，必要时绘制成图。 5. 结果分析：分析实验结果正确与否，讨论影响结果的原因 （观察到结果、现象的成因）。 实 验 目 的 1. 生物化学实验基本操作； 2. 分光光度法（比色法）的基本原理及分光光度计的使用； 3. 双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法 熟悉：标准曲线的绘制及其应用 实 验 内 容 1. 生物化学实验基本操作 刻度吸量管的使用 分光光度计的使用 玻璃仪器（使用过仪器）清洗 实 验 内 容 2. 分光分析法基本原理 朗伯—比尔(Lambert—Beer)定律 ： .Lambert氏定律 ： 一束单色光通过透明溶液介质时，光能被吸收一部分，被吸收光能的量与溶液介质厚度有一定比例关系。 实 验 内 容 2. 分光分析法基本原理 朗伯—比尔(Lambert—Beer)定律 ： .Beer氏定律 ：以溶液介质浓度变化代替溶液介质厚度的改变，光能的吸收与浓度改变有类同的关系，即一束单色光通过溶液介质时，光能被溶液介质吸收一部分，吸收多少与溶液介质浓度有一定的比例关系。 实 验 内 容 2. 分光分析法基本原理 朗伯—比尔(Lambert—Beer)定律 ： 3）.将Lambent氏定律和Beer氏定律合并 朗伯—比尔定律 : A=KCL A：absorbance K：摩尔吸光率 C：concentration L：溶液厚度 一束单色光通过溶液介质后，光能被吸收一部分，吸收多少与溶液的浓度和厚度成正比。 实 验 内 容 3. 分光光度计（ Spectrophotometer）的工作原理 实 验 内 容 3. 分光光度计的工作原理 实 验 内 容 3. 分光光度计的工作原理 双缩脲法测定蛋白质含量的原理 在碱性溶液中，双缩脲(H2N—CO—NH—CO—NH2)与硫酸铜作用形成紫红色的络合物，这个反应称为双缩脲反应。 双缩脲法测定蛋白质含量的原理 具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。蛋白质含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量