试验六酵母形态观察死活细胞鉴别和显微镜直接计数法.DOC

实验六 酵母形态观察、死活细胞鉴别和显微镜直接计数法 酵母形态观察、死活细胞鉴别 一、实验目的 1 观察酵母菌的形态和出芽生殖方式 2 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法 二、基本原理 酵母菌是单细胞真核微生物，通常以出芽方式进行无性繁殖，有的进行分裂繁殖；通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖，有性繁殖要在特定培养条件下才能进行。 染料美蓝氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞分泌的还原酶，能使美蓝由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。 三、实验器材 1 菌种：酿酒酵母 2 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片等 四、实验步骤 美蓝浸片的观察 在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。（染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。） 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。镜检。 将制片放置约3min后再次镜检并对照，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。 滴加染液－涂片－加盖玻片－镜检－3min后再次镜检 五、实验报告 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征 思考题1、酵母死活细胞鉴别的基本原理是什么？ 微生物大小测定 一、实验目的 学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法 二、基本原理 测微尺：包括目镜测微尺和镜台测微尺。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0.01mm(即10um)。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。 目镜测微尺是放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度。由于放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度不一样。因此，需首先校正目镜测微尺。 三、实验器材 1 菌种：酿酒酵母 2 仪器：目镜测微尺、镜台测微尺、显微镜、载玻片、盖玻片等 四、实验步骤 1 装目镜测微尺 2 校正目镜测微尺 在40×镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以可得 目尺每格长度(μm)=（台尺格数×10）/目尺格数 目尺每格长度(μm)=（10×10）/60=1.67um 3 菌体大小测定； 选择5个左右的细胞进行测定，求平均值； 圆球型直径表示，椭圆型用长轴×宽轴表示。 五、实验报告 1 实验结果（P41 1） （1）目镜测微尺标定结果： 低倍镜下 倍目镜测微尺每格长度是 um。 高低倍镜下 倍目镜测微尺每格长度是 um。 油镜下 倍目镜测微尺每格长度是 um。 （2）菌体大小测定结果。（每种菌测3个细胞，取平均值） 2 思考题（P42 2） 在不改变目镜和目镜测微尺，而改变不同放大倍数的物镜来测定同一细胞的大小时，其测定结果是否相同？为什么？ 显微镜直接计数法 一、实验目的 1 明确血细胞计数板计数的原理 2 掌握用血细胞计数板进行微生物计数的方法 二、基本原理 显微镜直接计数法 血球计数板的结构： 四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。 每一个大方格边长为1mm，高0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成1ml菌液中的总菌数。若设5个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B， （1）如果是25个中方格计数板，则计算方法为： 1ml菌液中的总菌数=（A/5)×25×104×B=50000A·B(个) （2）如果是16个中方格计数板，则计算方法为： 1ml菌液中的总菌数=(A’/4) ×16×104×B=40000A’·B(个) 三、实验器材 1 菌种：酿酒酵母 2 仪器：血球计数板、显微镜、载玻片、盖玻片等 四、实验步骤 1.菌悬液制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。 2 镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需洗清，吹干后才能进行计数。 3 加样品 将清洁干燥的血细