GB/T 19167-2003传染性囊病诊断技术.pdf

ICS65.020.30 B 41 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T 19167-2003 传 染 性 囊 病 诊 断 技 术 Diagnostictechniquesforinfectiousbursaldisease 2003-06-02发布 2003-11-01实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质量监督检验检 疫总局 GB/T19167-2003 ．告J山 ～J～ NUJ 青 传染性囊病 I（BD）又名鸡传染性法氏囊病、腔上囊炎、甘布罗病，是由双RNA病毒科禽双RNA病 毒属的传染性囊病病毒 I（BDV）引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触传染性疫病。 本标准参考了世界动物卫生组织W［orldOrganizationforAnimalHealth英（）,OfficeInternational desEpizooties法（）,OIE］的《哺乳动物、禽、蜜蜂A和B类疾病诊断试验和疫苗标准手册》所推荐的 方法。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准由北京市农林科学院畜牧兽医研究所负责起草，由广西兽医研究所协作起草。 本标准主要起草人：刘有昌、刘爵、周蛟、姚炜光、张方亮、贺荣莲、吴健敏、兰美益、黄红梅、蒋冬福、 韦志锋。 GB/T19167-2003 传 染 性 囊 病 诊 断 技 术 范围 本标准规定了传染性囊病病毒的病原分离、抗原的检测和检测特异性抗体的琼脂凝胶免疫扩散试 验、病毒血清微量中和试验、酶联免疫吸附试验的技术要求。 本标准适用于传染性囊病的诊断与检疫。 2 病毒的分离及其鉴定 2.1 材料准备 灭菌组织研磨器、离心机、37℃温箱、孵化器、灭菌吸管、橡胶吸头、灭菌小瓶、灭菌6“针头、灭菌注 射器、石蜡。 2.2 病料的采集和处理 采集具有病变的新鲜法氏囊，用加有抗生素(3（000IU/mL青霉素和3000pLg/mL链霉素）的胰蛋 白酶磷酸缓冲液或生理盐水制成20％的组织匀浆液，在37℃作用30min-60min,l500r/min离心 20min，收集上清液。经菌检培养为阴性后作为接种材料。 2.3 鸡胚接种 2.3.1接种 将收集的上清液以每只0.2mL的量经绒毛尿囊膜接种9日龄～11日龄无传染性囊病母源抗体鸡 胚或SPF鸡胚 无（特定病原体鸡胚），接种后用石蜡封住接种孔。370C孵育，每天照蛋检查，弃去24h内 死亡的鸡胚。 2.3.2 鸡胚剖检结果判定 2.3.2.1标准IBDV分离物接种后判定：标准的IBDV分离物接种鸡胚后3d^-5d可致鸡胚死亡。死 亡鸡胚充血，在羽毛囊、趾关节和大脑有血斑性出血。肝脏多可见坏死，也可见色淡似熟肉样。 2.3.2.2 IBDV变异株分离物接种后判定：IBDV变异株经绒毛尿囊膜接种鸡胚，一般不致死鸡胚，接 种后5d-6d剖检，可见鸡胚大脑和腹部皮下水肿、发育迟缓、呈灰白色或奶油色，肝脏常有胆汁着色 或坏死，脾脏通常肿大2倍一3倍，但颜色无明显变化。 2.4 易感雏鸡接种试验 2.4.1 接种 取2.2述及的病料上清液0.5mL，经点眼、口服感染5只14日龄～21日龄无IBDV母源抗体鸡或 SPF鸡。同时设健康对照组。接种3d后将鸡剖杀，检查法氏囊及脾脏。 2.4.2 剖检接种结果 2.4.2.1标准IBDV接种结果：接种后偶见鸡死亡，剖检可见接种鸡法氏囊水肿、色黄，有时可见出血。 脾脏有时可见轻度肿大，表面有灰色点状病变。健康鸡则正常。 2.4.2.2 IBDV变异株接种结果：接种后不出现死亡，3d剖检可见法氏囊萎缩、质度硬，脾脏可见肿大 1倍～2倍。健康鸡则正常。 2.5 IBD病毒的鉴定 2.5.1 琼脂凝胶免疫扩散 A