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124 细胞生物学杂志 2003 年 in an inverted orientation between the CaM 35S promoter and the Nos 3 termination sequence. Transgenic tomato plants were obtained by Agrobacterium-mediated transfonnation of ∞tyledons. PCR detection and Southern blot analysis ∞nfirmed the integration of antisen四LeETRl gene in tomato genome. Ethylene pro- duction peak of transgenic fruits appeared 10d after ∞ntrol. After 30 days in normal rα， )ffi， transgenic tomatos eyevtually developed an orange colour but never turned red.τnese dat出 suggest that LeETRl was closely ∞r­ related with the ripening of tomato fruits. Key wor由: Tomato fruit LeETR1 gene Cloning Antisense expression VI四ωr 在础 原位胶原酶循环灌注法分离猪肝细胞 陈钟祷，** T义涛H (骨南通医学院附属医院普外科南通 226001 ..南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科南京 210008) 摘 要 本文建立了原位肢原酶循环灌注分离猪肝细胞方法并与离体两步肢原酶灌注法进行 了比较。猪门静脉和下腔静脉分别插管，先用 D-Hanks 液灌注，再采用自制的循环灌流装直进行 5 肢原酶循环原位灌注分离猪肝细胞，分离后的肝细胞以 5 x 10 /ml 培养，观察分离和培养汩的肝 细胞产量、活率、蛋白质合成功能、葡萄糖合成功能和LDH含量。同时测定离体组的上述指标。研 7 究结果表明采用原位肢原酶循环灌注法每克肝组织分离获得的肝细胞总量为 5.1X10 ，肝细胞活 率 98.6% ，培养 7d 肝细胞活率89.5% 。肝细胞的蛋白质合成功能在培养7d 中保持稳定;葡萄糖 合成功能从 1d 时 1.05 :t 0.15nmollcell 下降到 3d 时 O. 74 :t O. 09nmollcell; LDH 含量在 3d 较高。 原位肢原酶循环灌注法分离的猪肝细胞总量、活率高于离体法;蛋白质合成功能和葡萄糖合成功能 强于离体法。因此，原住肢原酶循环灌注分离猪肝细胞方法可获得大量高活率和良好功能的猪肝 细胞。 关键词:肝细胞分离胶原酶培养生物人工肝 (大连)产品，青霉素、链霉素为华北制药厂产品，CDZ 培养箱 以培养肝细胞为生物成分的生物人工肝(BAL) 为日本 lKEMaro RKll0-2 o 有望成为治疗急性肝衰竭的有效手段[1剖。随着该 2. 实验分组 研究的深人，迫切需要理想的肝细胞来源与分离、培 将10 只中国实验用小型乳猪平均分为两组，A组为原 养技术。猪肝细胞因结构和功能与人肝细胞相似，