生物化学与分子生物学实验指导 - 海南医学院.pdf

  《生物化学与分子生物学实验指导》 供生物技术专业使用      海南医学院理学院 生物化学教研室 生物技术专业实验室 目 录 第一篇 理论部分 ……………………………………………………………………………………………………….. 第一章 光谱技术 第二章 电泳技术 第三章 层析技术 第四章 离心技术 第五章 蛋白质分析技术 第六章 酶的分离与纯化 第二篇 实验部分 ……………………………………………………………………………………………………….. 实验一 双缩脲法测定蛋白质含量 实验二 Folin 试剂法(Lowry 法)测定蛋白质含量 实验三 紫外吸收法测定蛋白质含量 实验四 凯氏定氮法测定蛋白质含量 实验五 血红蛋白及其衍生物的吸收光谱分析 实验六 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定（赖氏法） 实验七 底物浓度对酶活性的影响 实验八 血清乳酸脱氢酶（LDH）同工酶的测定 实验九 葡萄糖氧化酶（GOD）法测定血糖含量 实验十 血清尿素氮测定——二乙酰-肟法 实验十一 血清总甘油三脂测定——酶联测定法测定 实验十二 乙酰丙酮测定法测定血清总甘油三脂含量 实验十三 血清总胆固醇测定——酶联测定法测定血清总胆固醇含量 实验十四 硫磷铁比色法测定血清总胆固醇含量 实验十五 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳——微量法 实验十六 蛋白质的分离提纯与鉴定 实验十七 微量柱色谱——DE-52 分离血清γ-球蛋白 实验十八 DEAE 纤维素离子交换色谱分离血清蛋白质 实验十九 酶的特异性及温度和 pH对酶活性的影响 实验二十 维生素 C 的含量的测定（碘滴定法） 实验二十一 植物超氧化物歧化酶的测定 实验二十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 1 第一篇 理论部分 2 第一章 光谱技术 大量的化学物质具有一定的颜色，许多无色物质也可以与显色剂作用，生成有色物质，这些有色化 合物本身随浓度的变化而出现颜色深浅的改变，浓度越大，颜色越深，相反亦然。为此可以通过测定颜 色深浅的方法对此有色物质进行定量分析。 最早的比色法是纳氏比色法，它是按浓度从低到高，配好一系列标准管，然后将待测样品与标准管 逐个进行比较定量，也就是检验中的比色列法，如黄疸指数的比色法，就属于这一类，实际属于目力比 色列法。这种方法虽然简单，但是误差很大。后来改用目力比色法进行比色，最先使用的是杜氏目力比 色计进行比色定量，原理和结构是比色计下端有一反光镜，利用目视和电灯光源向上反射，其上方有两 个底部透明的相同比色杯，分别盛装标准液和待测液，两杯内浸入透明固定玻璃柱，通过螺旋调节比色 杯上下，以改变玻璃柱与比色杯中溶液的距离，经过三棱镜使光进入目镜的视野中，再使两半园光强相 等时，读取读数，经换算出待测物浓度。此方法由于目力的主观因素在内等多种影响因素很多，误差也 很大。为了克服人为主观因素的误差，进一步用光电池代替人的肉眼观察，从而设计出光电比色计，其 原理是一束平行单色光通过一定厚度的有色溶液后光线被吸收一部分，未被吸收的光线透过溶液经光电 池接受，从而使电光能转换成电能，用检流计测电流大小，从而计算出待测溶液的浓度。 光电比色计只适合在