非致病性大肠杆菌鞭毛蛋白对o 型口蹄疫病毒的佐剂效果 - 中国农业科学.pdf

中国农业科学 2017,50(9):1714-1722 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.09.017 非致病性大肠杆菌鞭毛蛋白对O型口蹄疫病毒的佐剂效果 1,2 1 1,2 1 1 孙小涵 ，张碧成 ，张强 ，何孔旺 ，张雪寒 1 2 （江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室， 南京 210014 ； 吉林农业大学动物科学技术学院， 长春 130118） 摘要：【目的】口蹄疫（foot and mouth disease, FMD）的传染性强，传播广，给世界经济和社会发展带来 巨大危害，目前疫苗接种仍是主要而有效的防控手段。以增强口蹄疫疫苗免疫效力为目的，基于国内外对鞭毛蛋 白佐剂的深入了解与研究，对非致病性大肠杆菌鞭毛进行修饰，研究鞭毛蛋白（flagellin, F）以及有无LTMT佐 剂不同重组鞭毛蛋白对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virse, FMDV)的佐剂作用。【方法】通过体外表达获 得 pCold-F0、pCold-F0-LTMT、pCold-F0NC、pCold-F0NC-LTMT 4 种不同重组鞭毛蛋白，用间接 ELISA 方法检测 pCold-F0-LTMT和pCold-F0NC-LTMT蛋白的生物学活性，按照5 μg/只小鼠蛋白量与FMDV 灭活抗原混合制备疫苗， 同时设置添加或者不添加ISA 206佐剂组，皮下接种Balb/c小鼠，共免疫2次，每次间隔2周。分别于免疫前和 免疫后 14、21、28、35和45 d采血并采集小鼠粪便，45 d后取小肠后段，采用阻断ELISA方法检测血清IgG 抗 体滴度，用间接ELISA方法检测小鼠粪便和肠洗液中特异的分泌性IgA（secretory IgA, SIgA）抗体滴度，以评 估免疫效力。【结果】SDS和 Western blot 分析表明，4 种不同重组鞭毛蛋白成功表达。并用 GM l-ELISA 方法验证了pCold-F0-LTMT和 pCold-F0NC-LTMT的生物学活性，融合蛋白F0-LTMT和F0NC-LTMT保留了与GM l 结 合能力。动物试验结果表明，疫苗经皮下注射接种后，单独口蹄疫抗原组没有产生明显的抗体水平，而鞭毛蛋白 佐剂组比单独的口蹄疫抗原组，IgG滴度高，并且产生sIgA抗体滴度更早、更高。此外，LTMT与鞭毛蛋白协同作 用能刺激小鼠机体产生更高的IgG和sIgA。在试验中，当鞭毛蛋白与ISA 206佐剂联合使用时，血清中IgG滴度 大幅增高，且抗体持续期延长。口蹄疫抗原与ISA 206佐剂和F0NC-LTMT混合使用效果最佳，显示对FMDV的最好 保护。【结论】数据表明，黏膜佐剂 F0-LTMT 发挥双重佐剂活性，皮下注射可显著提高 FMDV 全身特异性 IgG 和局 部sIgA水平，显示其具有良好的应用前景。 关键词：口蹄疫病毒；非致病性大肠杆菌；鞭毛蛋白；佐剂 Adjuvant Effects of Flagellin from Non-Pathogenic E.coli on FMDV 1,2 1 1,2 1 1 SUN XiaoHan , ZHANG BiCheng , ZHANG Qiang , HE KongWang , ZHANG XueHan 1 ( Institute of Veterinary Research, Jiangsu Academy of Agr