Lenti-Pactrade; HIV 慢病毒包装试剂盒.PDF

Lenti-Pac™ HIV 慢病毒包装试剂盒 使用手册 目录 1 产品概述 2 试剂盒组成 3 其它所需实验材料 4 实验前准备 5 制备慢病毒 6 慢病毒滴度检验 7 以慢病毒感染目的细胞 8 使用许可与质量保证 GeneCopoeia,Inc. 广州易锦生物有限公司 广州高新技术产业开发区广州科学城 掬泉路3 号广州国际企业孵化器F 区8楼 邮编：510663 电话：4006-020-200 邮箱：sales@ 英文网址： 中文网址： ©2017GeneCopoeia,Inc. Lenti-Pac™ HIV 慢病毒包装试剂盒 – 使用手册 1. 产品概述 HIV （人类免疫缺陷病毒）骨架的慢病毒载体是目前最常用的慢病毒表达载体，它能在体外或 体内实验有效介导外源基因转导多种分化或非分化哺乳动物细胞，使外源基因稳定整合靶细胞的基 因组，并进行稳定的高水平表达。 GeneCopoeiaLenti-Pac™ HIV 慢病毒包装系统是安全性较高的第三代慢病毒包装系统，表达载体自 身失活，不产生额外的慢病毒复制。该系统包括：混合包装质粒、EndoFectin™-Lenti 转染试剂、可 进一步提高滴度的TiterBoost™滴度增强剂、以及eGFP 阳性对照质粒。Lenti-Pac™ HIV 慢病毒包装 系统可将HIV 载体的慢病毒表达克隆包装成为具有转导效果的慢病毒颗粒，包装所得的慢病毒颗 粒可立即使用，介导目的基因在哺乳动物细胞进行高效表达。 GeneCopoeia提供40000 多种人源及小鼠源的慢病毒载体ORF 表达克隆，以及针对人源、小鼠 源、大鼠源及其他哺乳类动物染色体组靶基因的慢病毒载体shRNA 克隆。除此以外，GeneCopoeia 同时提供20000 多种人源慢病毒载体miRNA 前体表达克隆、miRNA 抑制剂表达克隆以及启动子报 告克隆，18000 种小鼠的慢病毒载体启动子报告克隆。以上所有克隆均应用HIV 骨架，可随时应用 于慢病毒包装。 根据疾病控制中心制定的标准，GeneCopoeia 第三代HIV 慢病毒包装系统满足生物安全第二级别 （BSL-2）的要求。 1. 删除了HIV 载体3’LTR 的U3 区段增强子，使慢病毒载体自体失活，慢病毒进行转导后无法 自行复制，提高使用安全性。 2. 5’LTR 上游应用RSV 启动子，使病毒RNA 的生产无需依赖Tat，进一步减少对野生型HIV 骨 架的依赖。 3. 对慢病毒表达克隆的包装、复制和转导起关键作用的HIV 骨架组件降低至3个（gag、pol、rev）， 并分别在3个不含包装信号的质粒进行表达；此外，3个组件与慢病毒载体、VSV-G表达载体 或其它相关载体均无显著同源结构，防止通过同源重组产生可自行复制的病毒。 4. 表达HIV 骨架相关组分 （gag、pol、rev）的包装质粒不含包装信号，因此，包装所得的的慢 病毒颗粒不含HIV 骨架相关组分，从而无法自主复制。 2．试剂盒组成 试剂盒组成及推荐储存环境 (表格内容参照货号Cat.No.LT001/LT002) 试剂盒成分 包装规格 运输温度 保存条件 100 μl(0.5μg/μl) 4 - 8°C可保存至少6个月 HIV 混合包装质粒 常温运输 200 μl(0.5μg/μl) 可根据每次用量，分装保存于-80°C，避免反复冻融。 eGFP 阳性对照质粒 约10μg 常温运输 4 - 8°C可保存至少12 个月 EndoFectin™ 500 μl 4 - 8°C 12 常温运输 可保存至少 个月 转染试剂 1ml TiterBoost™ 滴度 500 μl 4 - 8°C 12 常温运输 可保存至少 个月 增强剂 (